Disulfiram

结合实验

测定纯化后的20S蛋白酶体糜蛋白酶样活性。将纯化后的17.5 ng 20S蛋白酶体加入到100 μL测定缓冲液 (50 mmol/L Tris-HCl, pH 7.5) 中，再添加或不添加不同浓度的氯化铜、Disulfiram或Disulfiram-铜混合物以及10 μmol/L荧光肽底物Suc-LLVY-AMC（用于检测蛋白酶体糜蛋白酶样活性），在37℃下，将其孵育2小时。孵育后，通过Wallac Victor3多标记计数器，选用365 nm激发光滤片和460 nm发射光滤片，测定水解生产的AMC基。

细胞系

MDA-MB-231细胞

制备方法

在DMSO中的溶解度大于10 mM。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37℃加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20℃可放置数月。

反应条件

5 ~ 20 μM；24小时

实验结果

在培养的乳腺癌MDA-MB-231细胞中，Disulfiram-铜复合物在诱导癌细胞凋亡前有效抑制蛋白酶体活性。

动物模型

MDA-MB-231肿瘤异种移植小鼠模型

给药剂量

50 mg/kg/d；口服给药；持续29天

实验结果

在MDA-MB-231肿瘤异种移植小鼠模型中，Disulfiram显著抑制肿瘤生长（74％）。上述作用与体内蛋白酶体抑制和细胞凋亡诱导相关。

其它注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。虽然化合物的实际溶解度可能与其理论值略有不同，但仍处于实验系统误差的允许范围内。

References:

[1]. Chen D, Cui QC, Yang H, Dou QP. Disulfiram, a clinically used anti-alcoholism drug and copper-binding agent, induces apoptotic cell death in breast cancer cultures and xenografts via inhibition of the proteasome activity. Cancer Res. 2006 Nov 1;66(21):10425-33.