NVP-BSK805
mRNA synthesis
In vitro transcription of capped mRNA with modified nucleotides and Poly(A) tail
Tyramide Signal Amplification (TSA)
TSA (Tyramide Signal Amplification), used for signal amplification of ISH, IHC and IC etc.
Phos Binding Reagent Acrylamide
Separation of phosphorylated and non-phosphorylated proteins without phospho-specific antibody
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)
A convenient and sensitive way for cell proliferation assay and cytotoxicity assay
SYBR Safe DNA Gel Stain
Safe and sensitive stain for visualization of DNA or RNA in agarose or acrylamide gels.
Inhibitor Cocktails
Protect the integrity of proteins from multiple proteases and phosphatases for different applications.
NVP-BSK805 是一种强效的和选择性的JAK2抑制剂,IC50值为0.58 nM [ 1 ]。
Janus激酶2(JAK2)是JAK 家族的成员之一,并且是一种非受体酪氨酸激酶。通过激活信号转导及转录活化蛋白(STATs),调节细胞核中的信号转导。STATs随磷酸化作用形成二聚体并进入细胞核内以调节目标基因的激活[ 2 ]。
在JAK 放射滤膜结合激酶检测中,NVP-BSK805 抑制全长的野生型JAK2和JAK2V617F 酶,IC50 值分别为0.58 nM 和0.56 nM [ 1 ]。在JAK2表达的CHRF-288-11、SET-2和HEL细胞中,NVP-BSK805抑制STAT5a磷酸化[ 2 ]。
在注射有JAK2V617F 依赖型Ba/F3 细胞的SCID米色小鼠中,与对照组相比,NVP-BSK805 (150 mg/kg) 在6小时和12小时抑制近50%脾脏提取物中STAT5的磷酸化。在注射诱导瞬时红细胞增多症和脾肿大的重组人红细胞生成素(rhEpo)的大鼠中, NVP-BSK805 剂量依赖性地抑制脾中rhEpo诱导的STAT5磷酸化[ 1 ]。
参考文献:
[1]. Baffert F, Régnier CH, De Pover A, et al. Potent and selective inhibition of polycythemia by the quinoxaline JAK2 inhibitor NVP-BSK805. Mol Cancer Ther, 2010, 9(7): 1945-1955.
[2]. Ringel F, Kaeda J, Schwarz M, et al. Effects of Jak2 type 1 inhibitors NVP-BSK805 and NVP-BVB808 on Jak2 mutation-positive and Bcr-Abl-positive cell lines. Acta Haematol, 2014, 132(1): 75-86.
Physical Appearance | A solid |
Storage | Store at -20°C |
M.Wt | 490.55 |
Cas No. | 1092499-93-8 |
Formula | C27H28F2N6O |
Synonyms | BSK 805;BSK-805;BSK805;NVP-BSK 805 |
Solubility | ≥20.95 mg/mL in DMSO; ≥3.45 mg/mL in H2O with gentle warming and ultrasonic; ≥4.75 mg/mL in EtOH with gentle warming and ultrasonic |
Chemical Name | 4-[[2,6-difluoro-4-[3-(1-piperidin-4-ylpyrazol-4-yl)quinoxalin-5-yl]phenyl]methyl]morpholine;dihydrochloride |
SDF | Download SDF |
Canonical SMILES | C1CNCCC1N2C=C(C=N2)C3=NC4=C(C=CC=C4N=C3)C5=CC(=C(C(=C5)F)CN6CCOCC6)F.Cl.Cl |
运输条件 | 蓝冰运输或根据您的需求运输。 |
一般建议 | 不同厂家不同批次产品溶解度各有差异,仅做参考。若实验所需浓度过大至产品溶解极限,请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。溶液形式一般不宜长期储存,请尽快用完。 |
激酶实验 [1]: | |
酶活性分析 |
构建含人JAK2激酶结构域(840 ~ 1132位氨基酸)的质粒pAcG2TtevJAK2。分别构建JAK3 (813 ~ 1124)、TYK2 (888 ~ 1187) 和JAK1 (866 ~ 1154) 质粒。根据产品手册 (BD Biosciences Pharmingen) 构建含BD BaculoGoldTM Bright线性DNA的融合杆状病毒,进行空斑实验和单一斑块病毒扩增实验。在27°C下,用100 mL加了Penicillin/Streptomycin溶液的ExCell420培养基 (JRH Biosciences Ltd)培养Sf9细胞48小时,使其表达Janus激酶结构域。在悬浮培养细胞的浓度为1 × 106时,进行感染。用可溶性蛋白的产量优化每个病毒的感染复数(MOI)。在MOI分别为1和0.5时,细胞表达人JAK2、JAK1、JAK3和TYK2激酶结构域。在27°C下,细胞于48小时后表达JAK2,于48或72小时表达JAK1、JAK3和TYK2。感染后48小时或72小时后,将100 mL表达培养液离心5分钟(3000 × g),收集细胞。在4°C下,用12 mL裂解缓冲液裂解细胞30分钟,缓冲液成分为50 mM Tris-HCl,pH 7.5,150 mM NaCl,2 mM EDTA,1 mM DTT,1 mM原钒酸钠,1 % Triton X-100,10 % 甘油,1 × 不含EDTA的蛋白酶完全抑制剂混合物 (Roche Diagnostics) 和12.5 U/mL Benzonase。14,000 × g离心45分钟,分离颗粒性不可溶物质。在4°C下,利用GST标记的亲和性纯化蛋白激酶结构域。将之前离心所得的上清与0.2 mL含50 % Glutathione Sepharose 4B的悬浮液置于4°C下孵育2小时,然后用1 mL含50 mM Tris-HCl,pH 7.5,150 mM NaCl,0.1 % Triton X-100,1 mM DTT和10 %甘油的缓冲液洗5次。用0.25 mL的洗脱缓冲液(50 mM Tris-HCl,pH 7.5,150 mM NaCl,0.1 % Triton X-100,1 mM DTT, 10%甘油,10 mM还原性L-谷胱甘肽)洗脱结合到胶上的蛋白,分5次洗脱,每次孵育10分钟。用Amicon Ultra-4离心超滤管浓缩洗脱液至1/5的体积。加入Brij35至其终浓度为0.1%,将蛋白分成小份,置于-80℃速冻保存。在上述储存条件下,其激酶活性能保持至少6个月。在含0.1 μM [γ33P]-ATP,1 mM MnCl2,5 mM MgCl2,30 μM合成多肽底物EQEDEPEGDYFEWLE,1 mM DTT,1 % DMSO,50 μg/mL BSA,0.01% Brij35和50 mM Tris-HCl pH 7.5的缓冲体系中,加入JAK激酶结构域,室温孵育30分钟。对于所有蛋白,ATP的浓度均低于其Km值。用XLfit? (型号205)的全局拟合功能以及逻辑斯谛方程对曲线进行非线性回归拟合。其它地方已介绍了全长野生型JAK2及其突变体V617F的表达与鉴定和激酶实验条件。NVP-BSK805的激酶选择性实验如下:在Caliper实验中,当多肽底物被磷酸化后,多肽底物在电场中会有不同的迁移速度,以此来检测激酶反应。由于多肽带有荧光标记,在毛细管系统中可以检测及定量多肽。用LC3000仪器 (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA, USA) 对多肽的荧光进行定量。在激酶实验中,激酶的活性可以通过检测剩余的ATP数量来定量。在LanthaScreen? TR-FRET激酶实验中,铽元素作为镧系元素螯合物,结合抗磷酸化底物的抗体。 |
细胞实验 [1]: | |
细胞系 |
Ba/F3细胞 |
制备方法 |
溶于DMSO。若配制更高浓度的溶液,一般步骤如下:请将试管置于37℃加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20℃可放置数月。 |
反应条件 |
100 nM;72小时 |
实验结果 |
NVP-BSK805抑制JAK2V617F细胞 (Ba/F3) 生长,而且诱导细胞凋亡,其GI50在 < 100 nM的浓度。 |
动物实验 [1]: | |
动物模型 |
rhEpo诱导的红血球增多症雌性BALB/c小鼠 |
给药剂量 |
50、75和100 mg/kg;口服给药;每日1次 |
实验结果 |
给予BALB/c小鼠25、50和100 mg/kg NVP-BSK805能抑制rhEpo诱导的STAT5磷酸化以及rhEpo介导的红细胞增多和脾肿大。 |
其它注意事项 |
请于室内测试所有化合物的溶解度。虽然化合物的实际溶解度可能与其理论值略有不同,但仍处于实验系统误差的允许范围内。 |
References: [1]. Baffert F, Régnier CH, De Pover A, et al. Potent and selective inhibition of polycythemia by the quinoxaline JAK2 inhibitor NVP-BSK805. Mol Cancer Ther, 2010, 9(7): 1945-1955. |
Description | NVP-BSK805是一种强效的和选择性的ATP竞争性JAK2抑制剂,IC50值为0.5 nM,比对JAK1、JAK3 和TYK2的选择性高20倍以上。 | |||||
靶点 | JAK2 | |||||
IC50 | 0.5 nM |
质量控制和MSDS
- 批次: