BAY 80-6946 (Copanlisib)

生化脂质激酶测定

在包被2 μg/well磷脂酰肌醇 (PI) 和磷脂酰丝氨酸 (PS)（1:1摩尔比）的384孔MaxiSorp板中，测定BAY 80-6946对33P渗进PI的抑制作用，从而评估BAY 80-6946对PI3Kα、PI3Kβ和 PI3Kγ的作用。在每种PI3K亚型实验中，使用9 μL反应缓冲液（50 mM MOPSO，pH 7.0，100 mM NaCl，4 mM MgCl2，0.1% BSA）。上述反应缓冲液含7.5 ng His标记的N末端截短的p110α或p110β蛋白，或25 ng纯化的人p110γ蛋白。加入5 μL含有20 μCi/mL [γ-33P]-ATP的40 μM ATP溶液开始反应。在室温下孵育2小时后，加入5 μL 25 mM EDTA溶液终止反应。将板冲洗后，加入Ultima Gold闪烁混合物 (25 μL)。使用BetaPlate液体闪烁计数器测定掺入到固定PI底物中的放射性物质。

细胞系

一组癌细胞系

制备方法

该化合物在DMSO中的溶解度有限。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37 °C加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20 °C可放置数月。

反应条件

5 μM；72小时

实验结果

在一组PI3K信号持续激活的癌细胞系中，BAY 80-6946显著抑制细胞增殖。某些乳腺癌细胞、子宫内膜癌细胞以及血液肿瘤细胞对BAY 80-6946非常敏感（IC50值 < 10 nM）。

动物模型

大鼠KPL4肿瘤异种移植模型

给药剂量

0.5 ~ 6 mg/kg；静脉注射；从肿瘤细胞移植后的第14天开始给药，每隔2天给1次药，一共给5次

实验结果

在第25天（即最后1次给药后的第3天），0.5 mg/kg、1 mg/kg、3 mg/kg和6 mg/kg BAY 80-6946分别具有77%、84%、99%和100%的肿瘤生长抑制（TGI）率。此外，在3 mg/kg和6 mg/kg剂量下，BAY 80-6946导致完全的肿瘤消退。

注意事项

请于室内测试所有化合物的溶解度。虽然化合物的实际溶解度可能与其理论值略有不同，但仍处于实验系统误差的允许范围内。

References:

[1]. Liu N, Rowley BR, Bull CO, Schneider C, Haegebarth A, Schatz CA, Fracasso PR, Wilkie DP, Hentemann M, Wilhelm SM, Scott WJ, Mumberg D, Ziegelbauer K. BAY 80-6946 is a highly selective intravenous PI3K inhibitor with potent p110α and p110δ activities in tumor cell lines and xenograft models. Mol Cancer Ther. 2013 Nov;12(11):2319-30.