RNA
高得率,高性价比
APExBIO 提供高得率和高性价比的 mRNA 和长链RNA(多个碱基)的定制合成。在微克到毫克的级别上,开展广泛的mRNA修饰服务。mRNA 可从客户提供的 DNA 模板生成;或者我们可以从零开始, 提供完整的mRNA体外合成。我们为所有的标准 mRNA 片段进行 mCAP、ARCA 和 EZ Cap加帽或修饰核苷酸的处理。
请填写我们的mRNA定制合成问卷 。我们将很快给您答复并提供报价。
Modified Nucleotide-containing mRNA Synthesis
mRNA体外转录合成(IVT, in vitro transcription)
为了mRNA能最终有效地在体外翻译, 需要在体外转录合成mRNA时,掺入5’端的m7G加帽结构和3’端的多聚腺苷酸[poly(A)尾]结构。加帽的过程,是通过T7 RNA 聚合酶共转录,在mRNA分子5’端掺入诸如ARCA (Anti-Reverse Cap Analog)。 加尾的过程,是用Poly(A)聚合酶在mRNA分子3’端,加上poly(A)尾, 再用DNase酶消化DNA模板。5-甲基-胞苷(5-Methyl-CTP), 假尿苷(Pseudo/ ψ-UTP)和其他修饰核苷酸也可掺入mRNA, 来降低免疫原性和加强稳定性。合成后的mRNA适用于细胞转染、微注射、体外翻译和RNA疫苗等。
定制合成 的mRNA 拥有广泛的应用:
- --用于基因组编辑的mRNA,比如Zinc-finger Nuclease mRNA,TALEN mRNA,Cas9 mRNA和Recombinase mRNA等。
- --报告基因的mRNA,比如EGFP mRNA和 Luc mRNA, 用于荧光显微镜、流细胞测量和生物发光成像等。
- --重组mRNA, 用于non-integrating generation of iPSC。
产品验证:
mRNA纯化:
由T7 RNA聚合酶在体外转录合成的mRNA,可能含有各种污染物:比如未反应完全的小分子底物、反应所需的蛋白酶,以及反应中产生的非特异性产物,如过短或过长或未完全加帽的mRNA等。 某些RNA序列甚至会诱导高水平的免疫原性。
APExBIO提供高效的纯化技术,可去除相关污染物,从而提高下游应用的处理效率。
硅胶膜纯化柱(Silica-gel Membrane Spin Column)
它是一种用于快速核酸纯化的固相萃取技术。mRNA可以在特定条件下,结合到硅凝胶膜的固相,并在水中或TE (pH 7)中进行后续洗涤和洗脱步骤。这种方法清除了大多数蛋白质、DNA和NTPs。
HPLC纯化法(ÄKTA avant系统):
mRNA的纯化,可以通过ÄKTA avant系统,使用alkylated non-porous polystyrene-divinylbenzene copolymer microspheres和优化的缓冲体系,然后进行mRNA分析和mRNA分离。
HPLC 纯化法可以从体外合成和化学修饰后的mRNA 中,去除双链DNA和其他污染物,使 mRNA 具有更高水平的翻译,减少免疫原性或 RNA sensor激活。
我们所有的 mRNA 产品都提供:
- -将mCAP/ARCA/EZ Cap掺入到转录合成的mRNA片段中,以提高翻译效率。
- -通过加入经过修饰的核苷酸(5mCTP, ψUTP)和poly(A)尾,减少宿主细胞免疫反应并增强稳定性。
- -在合成mRNA过程中,加入DNase酶,降解DNA模板。
- -用磷酸酶去除RNA末端的5'三磷酸盐(5’ triphosphates),进一步减少哺乳动物细胞的先天免疫反应。
- -采用强大的纯化系统,提供高产量的 mRNA来适应大多数下游应用。
产品验证: