SpCas9 mRNA (ARCA, 5mCTP, ψUTP)
mRNA synthesis
In vitro transcription of capped mRNA with modified nucleotides and Poly(A) tail
Tyramide Signal Amplification (TSA)
TSA (Tyramide Signal Amplification), used for signal amplification of ISH, IHC and IC etc.
Phos Binding Reagent Acrylamide
Separation of phosphorylated and non-phosphorylated proteins without phospho-specific antibody
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)
A convenient and sensitive way for cell proliferation assay and cytotoxicity assay
SYBR Safe DNA Gel Stain
Safe and sensitive stain for visualization of DNA or RNA in agarose or acrylamide gels.
Inhibitor Cocktails
Protect the integrity of proteins from multiple proteases and phosphatases for different applications.
将SpCas9 mRNA (ARCA, 5mCTP, ψUTP)转染到细胞后,细胞可表达化脓性链球菌Cas9(SpCas9)蛋白。该SpCas9 mRNA可以与纯化的guide RNA(向导RNA)序列一起使用,用于CRISPR/Cas基因组编辑系统中基因组DNA靶标的识别和切割。CRISPR/Cas是细菌和古细菌的一种防御系统,可用来对抗入侵的病毒和质粒。化脓性链球菌细菌的II型CRISPR/Cas系统已被用于真核细胞中的基因编辑或基因组工程,该系统需要两个主要元件:内切酶Cas9和非编码向导RNA(gRNA)。Cas9蛋白可在单个gRNA的引导下,在指定基因组位置上引入DNA双链断裂(DSB)。与锌指核酸酶(ZFN)诱导的DSB相似,细胞随后会激活内源性DNA修复程序,即非同源性末端接合(NHEJ)或同源重组修复机制(HDR),对目标DSB进行修复。
该产品已经是5’端加帽,3’端加poly(A)尾和经过5mCTP/ψUTP 修饰的mRNA,可以模拟真核生物中加工成熟的mRNA。使用ARCA(抗反向帽类似物,货号B8175)以共转录的方式对mRNA进行加帽,形成了Cap 0结构,增加了mRNA的稳定性和翻译效率[1,2]。修饰核苷酸5mCTP(货号B7967)和ψUTP(Pseudo-UTP,货号B7972)的添加可以减少先天免疫刺激,增加mRNA的稳定性。Poly(A)尾的添加使mRNA更加稳定并提高mRNA的翻译起始效率[3]。
mRNA转染的优点:
· 无需核吸收——蛋白直接在细胞质中表达
· 其蛋白质表达比DNA转染更快
· 以完全不依赖启动子的方式表达蛋白质
· 没有基因组整合的风险
· 非常适合转染生长缓慢或不分裂的细胞
· 蛋白表达与mRNA的量直接相关
· 瞬时转染:蛋白质的表达在有限的时间内持续,避免了与积累有关的毒性
References:
[1] Stepinski J, Waddell C, Stolarski R, et al. Synthesis and properties of mRNAs containing the novel "anti-reverse" cap analogs 7-methyl(3'-O-methyl)GpppG and 7-methyl (3'-deoxy)GpppG. RNA. 2001;7(10):1486–1495.
[2] Jemielity J, Fowler T, Zuberek J, et al. Novel "anti-reverse" cap analogs with superior translational properties. RNA. 2003;9(9):1108–1122.
[3] Gallie DR, Tanguay R. Poly(A) binds to initiation factors and increases cap-dependent translation in vitro. J Biol Chem. 1994;269(25):17166–17173.
mRNA Length | 4521 nucleotides | ||
Concentration | 1 mg/mL | ||
Buffer | 1 mM Sodium Citrate, pH 6.4 | Storage | -40°C or below |
General tips | 请将其于冰上溶解,并小心防止RNase污染降解。 尽可能避免反复冻融。 不要涡旋震荡。 首次使用时,将其轻柔离心并分成几份,可供单独使用。 使用不含RNase的试剂和耗材,使用适当的无RNase技术。 直至与转染试剂混合,才可加入含有血清的培养基中。 | ||
Shipping Condition | 试用装:干冰运输。 |