Ramelteon

结合实验

在5％CO2/95％空气条件下，使用含有10％透析的胎牛血清（dFBS）的Eagle's Minimum Essential Medium-α（MEM-α）培养基培养和筛选稳定表达MT1或MT2受体（CHO-hMelR7）的细胞。在含有5mM EDTA的无Ca2+-Mg2+的Hanks平衡盐溶液中汇合收获细胞，并通过离心收集。将细胞在冰冷的50mMTris-HCl缓冲液（pH7.7，25℃）中匀浆，洗涤两次，沉淀，在进行结合测定之前储存在-30℃下。将Ramelteon和40pM 2-[125 I]褪黑激素与解冻的匀浆混合，总体积为1mL，并在25℃下温育150分钟，通过加入3mL冰冷的缓冲液终止反应，随后在Whatman GF/B上真空过滤。将滤器洗涤两次并通过γ-计数器计算放射性。将10mM褪黑激素存在下的结合定义为非特异性结合。

细胞系

胰腺INS-1 β细胞

溶解方法

该化合物在DMSO中的溶解度大于10 mM。若配制更高浓度的溶液，一般步骤如下：请将试管置于37℃加热10分钟和/或将其置于超声波浴中震荡一段时间。原液于-20℃可放置数月。

反应条件

2-14 h

实验结果

Ramelteon是MT1/MT2褪黑素受体的有效选择性激动剂。在表达人MT1或MT2受体的CHO细胞中，Ramelteon抑制毛喉素刺激的cAMP生成[2]。在表达MT1或MT2受体的神经元或小鼠小脑颗粒细胞中，Ramelteon能够增加脑源性神经营养因子（BDNF）的含量[3]。

动物模型

自由移动的猫

剂量

0.001、0.01及0.1 mg/kg；口服

实验结果

悬浮在0.5％（重量/体积）的甲基纤维素溶液中。

注意事项

在猫中，ramelteon具有促进睡眠的作用，并且不会导致学习、记忆或运动功能障碍以及奖励性质[4]。在临床研究中，Ramelteon减少持续性睡眠的潜伏期，在原发性慢性失眠的患者中，Ramelteon增加总睡眠时间和睡眠效率[1]。

动物模型

请测试所有化合物在室内的溶解度，实际溶解度和理论值可能略有不同。这是由实验系统的误差引起的，属于正常现象。

References:

[1]. Kato K, Hirai K, Nishiyama K, et al. Neurochemical properties of ramelteon (TAK-375), a selective MT1/MT2 receptor agonist. Neuropharmacology, 2005, 48(2): 301-310.

[2]. Nishiyama K, Hirai K. The melatonin agonist ramelteon induces duration-dependent clock gene expression through cAMP signaling in pancreatic INS-1 β-cells. PLoS One, 2014, 9(7): e102073.

[3]. Imbesi M, Uz T, Dzitoyeva S, et al. Stimulatory effects of a melatonin receptor agonist, ramelteon, on BDNF in mouse cerebellar granule cells. Neurosci Lett, 2008, 439(1): 34-36.

[4]. Miyamoto M, Nishikawa H, Doken Y, et al. The sleep-promoting action of ramelteon (TAK-375) in freely moving cats. Sleep, 2004, 27(7): 1319-1325.