Proteinase K
mRNA synthesis
In vitro transcription of capped mRNA with modified nucleotides and Poly(A) tail
Tyramide Signal Amplification (TSA)
TSA (Tyramide Signal Amplification), used for signal amplification of ISH, IHC and IC etc.
Phos Binding Reagent Acrylamide
Separation of phosphorylated and non-phosphorylated proteins without phospho-specific antibody
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)
A convenient and sensitive way for cell proliferation assay and cytotoxicity assay
SYBR Safe DNA Gel Stain
Safe and sensitive stain for visualization of DNA or RNA in agarose or acrylamide gels.
Inhibitor Cocktails
Protect the integrity of proteins from multiple proteases and phosphatases for different applications.
蛋白酶K是一种广谱性丝氨酸蛋白酶,我们的产品是从能够编码共附生白色侧齿霉菌内切蛋白酶的巴氏毕赤酵母细胞中提取的。它是一种高活性的蛋白酶,常用于消化各种蛋白质和酶(包括核酸内切酶,核酸外切酶,DNA酶或RNA酶)。因此,它常用于DNA制备并且不损害提取DNA的完整性。它在各种不同的条件下具有优异的性能:不同的pH值,缓冲液,洗涤剂(如SDS),螯合剂(如EDTA)和温度。蛋白酶K优先水解邻近疏水性氨基酸(脂肪族,芳香族等)的羧基端的肽键。
除了基因组的分离之外,它还可以检测酶的定位或从DNA中去除酶以提高克隆效率。
蛋白酶K的合适工作浓度通常在0.05-1mg / mL的范围内。酶的活性可被0.2-1%SDS或1- 4mol尿素刺激。蛋白酶K可以被钙离子(1-5 mM)激活,尽管钙离子不影响酶的活性,但它有助于酶的热稳定性并保护蛋白酶免于自溶。蛋白酶K有两个Ca2+结合位点,位于活性中心附近,但不直接参与催化机制。所以钙离子对蛋白酶K的底物结合位点具有调节功能。蛋白酶K会被DIFP或PMSF灭活。 然而,它不被EDTA,碘乙酸,胰蛋白酶特异性抑制剂TLCK,胰凝乳蛋白酶特异性抑制剂TPCK和对氯苯甲酸(p-chloromercuribenzoate)抑制。
我们建议工作的最佳pH值为7.5-8.0,最适温度为50-55°C。温度高于65°C时蛋白酶K会发生快速变性。您可以在95°C下作用10分钟使其热灭活。
References:
[1]. Kraus, E; et.al. Proteinase K from the Mold Tritirachium album limber, Specificity and Mode of Action. Z. Physiol. Chem., 357:939; 1976.
[2]. Jany,KD, et al. Amino Acid Sequence of Proteinase K from the Mold, Tritirachium albumlimber. Proteinase K; a Subtilisin-related Enzyme with Disulfide Bonds. FEBS Letter, 199,139.1986.
Cas No. | 39450-01-6 | SDF | |
Concentration | >600 U/mL (approximately 20 mg/mL) | ||
Formula | M.Wt | 29.3 kDa | |
Solubility | Soluble in 20 mM Tris-HCl, 1 mM CaCl2, 50% Glycerol, pH 7.4 | Storage | Store at -20°C |
Stability | pH range:4.0 to 12.5, temperature range: 25°C to 65°C. | ||
General tips | Apexbio保证在适当的温度和条件下交货日期后18个月内本产品保持较好的性能。 | ||
Shipping Condition | 试用装:蓝冰运输。 |
质量控制和DataSheet
- 批次:
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酶活性值:≥30U/mg冻干粉
- COA (Certificate Of Analysis)
- Datasheet
比活性值:≥40 U/mg蛋白
纯度:≥95%(Native-PAGE)
不含RNase和DNase
1)Q:Proteinase K (20 mg/mL) 在-20°C可以保存多久?
A:-20°C保存,避免反复冻融,一般可以保存至少一年。
2)Q:活力单位定义?
A:在pH 7.5、37°C的条件下,以血红蛋白为底物,1分钟内可以产生相当于1微摩尔酪氨酸Folin阳性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量,定义为一个单位蛋白酶K酶活力。
3)Q:当使用蛋白酶K需要稀释时,应该选用什么稀释液?
A:推荐使用Tris-Hcl或PBS等缓冲液,pH 7.4-7.8。