Lambda Protein Phosphatase (RNase-free)
λ蛋白磷酸酶，蛋白磷酸酶
| 规格 | 价格 | 货期 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 20kU | ￥400.00 | 现货 | |
| 100kU | ￥1200.00 | 现货 | |
| 200kU | ￥2000.00 | 现货 |
特色产品
- 适用于流式细胞仪和荧光显微镜检测
- 准确区分活细胞/凋亡细胞/坏死细胞
- 用于免疫印迹和质谱分析等后续操作
- 适用于30 KDa-130 KDa大小的蛋白
- 对细胞无毒性
- 步骤更简单，无需有机溶剂
- 可将信号灵敏度提高100倍
- 同时保持稳定的特异性和分辨率
- 提供更高的转录效率并抑制免疫激活
- 使用5-moUTP和Cy5-utp修饰
- 优异的扩增效率、可重复性和稳定性
- 卓越的灵敏度和准确性，操作简单
- 优化的缓冲液和T7 RNA聚合酶混合物
- 20 μL反应体系可获得更高的RNA产量
产品描述
λ蛋白磷酸酶（Lambda Protein Phosphatase，Lambda PP）是一种Mn2+-依赖性蛋白磷酸酶，对磷酸化的丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基具有脱磷酸活性。它是λ噬菌体上开放阅读框ORF221编码的包含221个氨基酸残基的产物。Lambda PP可用于蛋白的去磷酸化，进而用于研究蛋白磷酸化与其活性和结构的关系，以及验证蛋白磷酸化位点抗体的特异性等。
产品参数如下：
| 名称（Name） | Lambda Protein Phosphatase (RNase-free) |
| 别名（Synonym） | λ-PPase, Lambda PP, Serine/threonine-protein phosphatase, Protein Phosphatase, Lambda |
| 识别/切除序列（Recognition/Cleavage Site） | No specific recognition sequence; dephosphorylates phosphoserine (pSer), phosphothreonine (pThr), and phosphotyrosine (pTyr) residues |
| 分子量（M.Wt） | ~ 25 kDa |
| 蛋白表达系统（Source） | E. coli |
| 标签（Label） | Tag free |
| 纯度（Purity） | > 95%, determined by SDS-PAGE. |
| 酶缓冲液组分（Tev Protease Buffer） | 50 mM HEPES (pH 7.5 @ 25°C), 100 mM NaCl, 2 mM DTT, 0.01% Brij 35, 0.1 mM EGTA, 0.1 mM MnCl2, 50% Glycerol. |
| 10×酶切缓冲液（10×TEV Protease Reaction Buffer） | 500 mM HEPES (pH 7.5 @ 25°C), 1 M NaCl，20 mM DTT, 0.1% Brij 35. |
| 酶活（Enzyme activity） | 100 U/μL |
| 酶活定义（Unit Definition） | One unit (U) of activity represents the enzyme quantity needed to hydrolyze 1 nmol of p-nitrophenyl phosphate (50 mM) per minute in a 50 μL reaction system at 30°C. |
| 最佳pH范围（Optimal pH range） | pH 7.0 - 8.0 (optimal at pH 7.5) |
| 反应温度（Reaction Temperature） | 30°C |
| 失活条件（Inactivation Condition） | Inactivate at 65°C for 1 hour in 50 mM EDTA. |
产品性质
| 产品有效期 | 2年 |
| 蛋白来源 | 大肠杆菌 |
| 运输条件 | 干冰 |
| 注意事项 | 酶产品长时间保存请置于-80°C下，尽可能避免反复冻融。 |
产品组分
| 组分 | 组分货号 | 20kU | 100kU | 200kU | 保存条件 |
|---|---|---|---|---|---|
| Lambda PP (RNase-free) | S0177 | 0.2mL | 1mL | 2mL | -80°C |
| 10X Lambda PP Reaction Buffer | S0178 | 1mL | 5x1mL | 10x1mL | -80°C |
| 10× MnCl2 (10mM MnCl2) | S0179 | 1mL | 5x1mL | 10x1mL | -80°C |
运输条件:干冰 产品有效期:2年 | |||||
生物相关数据
操作说明
常见问题
Q1： λ蛋白磷酸酶是否适用于Phosbind实验中（如产品货号F4002）？
适用。在Phosbind实验中，λ蛋白磷酸酶可作为特异性验证工具（如体外激酶反应的阳性对照），用于确认观察到的条带位移确实源于蛋白磷酸化。通过设置对照组，将同一样品用λ蛋白磷酸酶处理后进行电泳，若处理前出现的慢迁移条带在处理后消失或信号显著降低，同时快迁移条带增强，即可证明该条带为磷酸化形式的蛋白，从而排除非特异性修饰或结合造成的假阳性。
Q2： λ蛋白磷酸酶适用于哪些实验应用？
验证蛋白磷酸化修饰、验证磷酸化位点抗体的特异性、研究蛋白磷酸化与其活性及结构的关系以及在Simple Western Charge Assays中鉴定磷酸化峰。
Q3： λ蛋白磷酸酶的底物特异性是什么？
该酶对磷酸化的丝氨酸（pSer）、苏氨酸（pThr）、酪氨酸（pTry）和组氨酸（pHis）残基均有去磷酸化活性。它是一种Mn²⁺等依赖型双特异性磷酸酶。
Q4： 石蜡切片是否可以使用λ蛋白磷酸酶处理？
不建议使用。
Q5： 如何储存λ蛋白磷酸酶？反复冻融是否有影响？
推荐储存温度：-70°C（-80°C）长期保存，-20°C可短期保存（如1周）；同时避免反复冻融，因反复冻融会导致酶活性降低，建议首次使用时分装保存。
Q6： 反应体系中的DTT起什么作用？
DTT作为还原剂，维持酶的活性构象。储存缓冲液中通常含有2 mM DTT，反应体系中通过1×反应缓冲液带入。
Q7： 哪些试剂会抑制或影响λ蛋白磷酸酶活性？
10 mM 钒酸盐 (Sodium Orthovanadate) 抑制约80–90%活性，50 mM EDTA 抑制约95%活性，50 mM NaF + 10 mM 钒酸盐抑制约90%活性。
Q8： 如何使λ蛋白磷酸酶失活？如何终止反应？
在50 mM EDTA存在的条件下，65°C加热1小时可使酶失活。EDTA作为金属离子螯合剂，可螯合酶活性所需的Mn²⁺，从而抑制酶活性。
Q9： λ蛋白磷酸酶与哪些酶抑制剂兼容？
兼容PMSF、benzamidine、leupeptin、pepstatin A、aprotinin、EDTA-free蛋白酶抑制剂混合物，但不兼容EDTA（螯合Mn²⁺）、钒酸盐、氟化钠、焦磷酸盐。
Q10： 酶切不完全或没有去磷酸化效果，是什么原因？
可能的原因包括：①酶量不足：对于不同的底物蛋白，最佳酶浓度需通过实验确定；②反应时间不够：可适当延长孵育时间；③Mn²⁺缺失：λ-PPase是Mn²⁺依赖型酶，反应体系中必须添加1 mM MnCl₂；④抑制剂存在：10 mM钒酸盐可抑制约90%；⑤活性，50 mM EDTA抑制约95%活性；⑥样品中含有变性剂或高盐：某些试剂可能干扰酶活性。
Q11： 如何通过超滤管去除λ蛋白磷酸酶？
λ蛋白磷酸酶的分子量约为25 kDa。30 kDa超滤管不适合去除该酶（酶分子量小于截留分子量，会进入滤过液）。建议使用10 kDa或更小截留分子量的超滤管。
沪公网安备 31011002003500