Klenow Fragment是大肠杆菌（E. coli）DNA聚合酶I经蛋白水解后产生的片段，保留了DNA聚合酶I的DNA聚合酶活性和3'→5'核酸外切酶活性，但缺失了原酶的5'→3'核酸外切酶活性。Klenow Fragment常用于随机引物法DNA标记，通过掺入带标记的核苷酸实现DNA探针的制备。对于5’端或3’端突出的粘末端也可以催化产生平末端。此外，Klenow Fragment还广泛用于cDNA第二链的合成，帮助构建双链cDNA文库。由于其缺乏5'→3'外切酶活性，Klenow Fragment在DNA合成过程中不会降解模板DNA，因而在实验中具有更高的稳定性和精确性。