phi29 DNA Polymerase，即phi29 DNA聚合酶，由大肠杆菌重组表达Bacillus subtilis噬菌体phi29 DNA Polymerase纯化所得，分子量约为67 kDa。phi29 DNA Polymerase具有很强的DNA连续合成能力，单次聚合反应可以实现长度超过70 kb的连续聚合延伸，从而适合用于对全基因组进行稳定扩增。

phi29 DNA Polymerase具有3'→5'外切酶活性，因此可保证扩增反应的高保真性。常用于在体外进行不依赖于热循环的高保真等温PCR、滚环复制，多重置换扩增和单细胞、病原微生物以及宏基因组的全基因组扩增等。