HyperScribe™ One-Step sgRNA Synthesis Kit

CRISPR/Cas9系统是一项应用广泛的基因组编辑技术，其原理是在sgRNA，也称gRNA (guide RNA)的引导下通过Cas9核酸酶对基因组DNA的靶向序列进行特异性位点切割。gRNA是由18-20 bp与靶基因序列互补的CRISPR RNA (crRNA)序列，以及能与Cas9核酸酶结合的Trans-activating crRNA (tracrRNA)序列所组成的融合产物。在细胞内，gRNA和Cas9核酸酶结合，并通过与靶基因互补的序列引导Cas9核酸酶切割靶基因位点3 '端NGG前间隔序列邻近基序(PAM)相邻的上游DNA序列，引起靶基因位点产生移码突变，从而导致最终目的基因的缺失突变。

本试剂盒基于PCR扩增和依赖T7 RNA聚合酶的体外转录进行一步法合成sgRNA。试剂盒内提供预混sgRNA reaction mix，包含Scaffold Template序列以及用于扩增该序列的下游引物，使用者仅需设计合成Target-specific DNA oligo上游引物，即可通过本试剂盒获得相应sgRNA。合成的sgRNA经纯化后可与Cas9 mRNA（货号R1015）共转染细胞，或在表达Cas9蛋白的细胞内进行基因编辑，也可以与Cas9核酸酶混合进行酶切鉴定实验。一步法试剂盒合成sgRNA相比两步法操作更为简单，但产量低于两步法，如需两步法合成sgRNA推荐使用HyperScribe™ Two-Step sgRNA Synthesis Kit（货号K1421）。