第 1 步：动物准备

动物品系

健康 8 月龄雄性野生型（WT）C57BL/6J 小鼠。每组至少 5-7 只小鼠。

饲养条件

每笼饲养 4-5 只，环境温度维持在 24±2℃，相对湿度 50%-60%，采用 12 小时光/暗循环（7:00-19:00光照）。自由摄食标准饲料，自由饮用无菌水，实验前适应环境至少1周。

第 2 步：造模实施

采用血管紧张素 II（Ang II）皮下渗透泵输注法诱导慢性血管损伤。

麻醉

小鼠吸入2.5%异氟烷进行全身麻醉，待翻正反射消失后固定于手术台，背部脱毛并消毒。

泵植入

血管紧张素 II（Ang II），用 0.9% 无菌生理盐水配制为600 ng/kg/min的工作浓度。在背部肩胛间区做 1cm 小切口，分离皮下组织形成囊袋，将预充血管紧张素 II（Ang II）的渗透泵植入囊袋，缝合切口。对照组植入预充生理盐水的渗透泵。

术后护理

术后单笼饲养 1 天，观察苏醒及活动情况，常规饲养 28 天以诱导稳定的血管损伤。

第 3 步：模型验证

造模 28 天后，需从血管损伤、胶质活化、认知障碍三个维度进行验证，确保模型构建成功。

血管损伤检测

小鼠麻醉后心脏灌注固定，取脑组织制备冰冻切片，进行 Lectin免疫荧光染色，测定海马齿状回毛细血管面积比例。

认知功能评估

包括新物体识别实验（NOR）、Y 迷宫实验、Morris 水迷宫（MWM）。

星形胶质细胞活化检测

脑组织切片进行GFAP（星形胶质细胞标志物）和VIM（反应性星形胶质细胞特异性标志物）免疫荧光双标。qPCR 检测海马组织VIM mRNA 水平。

多种疾病造模相关小分子化合物

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