EdU Imaging Kits (488)
mRNA synthesis
In vitro transcription of capped mRNA with modified nucleotides and Poly(A) tail
Tyramide Signal Amplification (TSA)
TSA (Tyramide Signal Amplification), used for signal amplification of ISH, IHC and IC etc.
Phos Binding Reagent Acrylamide
Separation of phosphorylated and non-phosphorylated proteins without phospho-specific antibody
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)
A convenient and sensitive way for cell proliferation assay and cytotoxicity assay
SYBR Safe DNA Gel Stain
Safe and sensitive stain for visualization of DNA or RNA in agarose or acrylamide gels.
Inhibitor Cocktails
Protect the integrity of proteins from multiple proteases and phosphatases for different applications.
测量细胞增殖和细胞周期是评估细胞健康,确定遗传毒性和评估药物药效的基本方法。常用的方法是直接测量DNA的合成。在以往的实验中,有几种方法,例如掺入放射性核苷(3H-thymidine)或BrdU。在这里,我们介绍一种新方法,点击化学-CuAAC(铜催化的叠氮化物-炔烃环加成反应),以及使用该反应直接测量在细胞周期S期的DNA合成。 “点击化学”是K. B. Sharpless于2001年引入的一个术语,它是生物连接中常用的一组具有生物相容性的小分子反应,允许将底物与特定生物分子(例如报道分子)结合在一起。
胸腺嘧啶核苷类似物,EdU(5-ethynyl-2’-deoxyuridine)可以在DNA合成过程中掺入DNA链中。 EdU的炔基是一种生物惰性基团,可以通过CuAAC反应与染料的叠氮基发生极强的选择性反应,从而生成1,2,3-三唑产物。 EdU和6-FAM Azide具有生物学上独特的基团,其连接后可以荧光标记增殖细胞的DNA,实验者可以获得低背景和高检测灵敏度。这种CuAAC反应可在极温和的条件下提供出色的区域选择性和定量转化。该反应是高效的,并且可以通过流式细胞术或荧光显微镜定量地使用。
EdU是BrdU的理想替代品,因为它不受苛刻的DNA变性条件(通常使用HCl,加热或用DNase消化)的影响。在基于BrdU的检测中,需要额外的DNA变性以使BrdU暴露于抗BrdU抗体,抗体与基于EdU的检测中使用的荧光染料相比是巨大的。与巨大的抗体不同,炔基和叠氮基的体积非常小,因此6-FAM Azide在基于醛的标准固定和去污剂透化作用下就可以进入DNA。此外,基于BrdU的方法耗时且难以连贯的进行,BrdU的抗体可表现出非特异性结合,此方法所需的苛刻处理可能会对样品的完整性,细胞形态和图像质量产生不利影响。由于在基于EdU的测定中反应条件温和,因此您可以准确确定细胞增殖,同时保留细胞形态,DNA完整性,抗原结合位点。 DNA完整性的保留是您可以进行DNA染色,包括使用用于细胞周期分析的染料染色。
6-FAM Azide(最大激发波长为496 nm,最大发射波长为516 nm)。
操作简单,所需时间更少,无需变性步骤或苛刻的处理
效率高,亮度高
更好的保护细胞形态,抗原结构和DNA完整性
由于不使用可变的BrdU抗体,因此具有很高的一致性
Components | 50-500 Tests |
EdU (Component A) | 5 mg |
6-FAM Azide (Component B) | 25 μL |
DMSO (Component C) | 4 mL |
10X EdU Reaction Buffer (Component D) | 4 mL |
CuSO4 (100 mM Aqueous Solution) (Component E) | 1 vial |
EdU Buffer Additive (Component F) | 400 mg |
Hoechst 33342 (10 mg/mL in Water) (Component G) | 35 μL |
Store the kit at -20ºC away from light and moisture, stable for 1 year. |