EdU Flow Cytometry Assay Kits (Cy3)
mRNA synthesis
In vitro transcription of capped mRNA with modified nucleotides and Poly(A) tail
Tyramide Signal Amplification (TSA)
TSA (Tyramide Signal Amplification), used for signal amplification of ISH, IHC and IC etc.
Phos Binding Reagent Acrylamide
Separation of phosphorylated and non-phosphorylated proteins without phospho-specific antibody
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)
A convenient and sensitive way for cell proliferation assay and cytotoxicity assay
SYBR Safe DNA Gel Stain
Safe and sensitive stain for visualization of DNA or RNA in agarose or acrylamide gels.
Inhibitor Cocktails
Protect the integrity of proteins from multiple proteases and phosphatases for different applications.
胸腺嘧啶核苷类似物,EdU(5-ethynyl-2’-deoxyuridine)可以在DNA合成过程中掺入DNA链中。 EdU的炔基是一种生物惰性基团,可以通过CuAAC反应与染料的叠氮基发生极强的选择性反应,从而生成1,2,3-三唑产物。 EdU和Cy3 / Cy5 azide具有生物学上独特的基团,连接后可以荧光标记增殖细胞的DNA,获得低背景的图像和高检测灵敏度。这种CuAAC反应可在极温和的条件下提供出色的区域选择性和定量转化。该反应是高效的,并且可以通过流式细胞术,荧光计或荧光显微镜以定量方式使用。
EdU是BrdU的理想替代品,因为它不受苛刻的DNA变性条件(通常使用HCl,加热或DNase消化)的影响。在基于BrdU的检测中,需要额外的DNA变性以使BrdU暴露于抗BrdU抗体,此抗体与基于EdU的检测中使用的荧光染料相比体积巨大。与巨大的抗体不同,炔基和叠氮基的体积非常小,因此Cy3 / Cy5叠氮化物在基于醛的标准固定和去污剂透化作用下就可以进入DNA。此外基于BrdU的测定后的样品,由于使用酸变性方法时,有可能破坏了抗原识别位点,导致细胞周期分布的信号改变。而基于EdU的测定与细胞周期染料兼容。 EdU分析还可以与一些针对表面和细胞内标记的抗体一起并用。但是,某些试剂或抗体偶联物可能与EdU检测反应不兼容,并且可能需要一些其他步骤来确保兼容性。
Cy3 azide (最大激发波长:555nm 最大发射波长: 570nm)
Cy5 azide (最大激发波长: 646nm 最大激发波长: 662nm)
操作简单,花费时间更少,无需变性步骤或苛刻的处理
效率高,亮度高
与某些抗体和细胞周期染料兼容
由于不使用可变的抗BrdU抗体,因此具有很高的一致性
Components | K1077-100 Test |
EdU (Component A) | 20 mg |
Cy3 Azide (Component B) | 260 μL |
DMSO (Component C) | 8.5 mL |
CuSO4 (100 mM Aqueous Solution) (Component D) | 1 mL |
EdU Buffer Additive (Component E) | 400 mg |
Store the kit at -20ºC away from light and moisture, stable for 1 year. |
1)Q:不同货号的EdU可以检测多少个样品?
A:EdU Imaging Kits(货号K1075与K1076)如果用于培养的细胞(6孔板)的检测,可以检测50个样品,每个样品的反应体系为500 μL的cocktail反应液;如果用于12孔、24孔、48孔,96孔,384孔板样品的检测,分别可以检测125、250、350、500、1250个样品,每个样品推荐的反应液用量为200 μL、100 μL、70 μL、50 μL、20 μL;
EdU Imaging Kits(货号K1075与K1076)如果用于冰冻或石蜡切片的检测,可以检测125-250个样品,每个样品的反应体系为100-200 μL的cocktail反应液。
EdU Flow Cytometry Assay Kits(货号K1077与K1078)如果用于流式细胞仪检测,可以检测100个样品,每个细胞样品的细胞数量宜为10-100万,每个样品的反应体系为500 μL的cocktail反应液。
2)Q:EdU可否用于动物体内注射?
A:EdU可以通过注射或进食等方式进行动物的体内标记。如以小鼠为例,可以按照10-200 mg/kg的用量,用PBS配制成一定浓度的EdU,腹腔注射、特定组织或器官局部注射或者加入饮用水中,4小时后或根据特定实验确定的适当时间后,快速处死小鼠,取出所需的组织,按照常规步骤制作冰冻切片或石蜡切片。具体用量跟所用动物的种类、体重和使用方式有关。
3)Q:能否在活细胞中进行Click EdU检测?
A:不可以。Click反应体系中的叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型,检测EdU信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。
4)Q:Cy3与Cy5有什么区别?
A:荧光基团不同,检测时发射荧光的颜色不同(Cy3 azide最大激发波长555 nm, 最大发射波长570 nm;Cy5 azide最大激发波长646 nm,最大激发波长662 nm),两者的实验效果相同,可根据个人需求进行选择。
5)Q:样本检测不到EdU阳性信号?
A:可能原因及解决方案如下:
a) 所用试剂可能变质,不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液;
b) 确保样本发生增殖,可设置阳性对照以确认染色过程无误;
c) EdU处理时间太短,细胞实验一般EdU处理时间宜为细胞周期长度的1/5-1/10,阳性率约为20%-30%,动物实验一般根据目的组织细胞的增殖速度进行时间调整,若细胞增殖速度慢,可延长EdU处理时间;
d) 染色过程干片、固定和通透不充分等因素,实验操作要严谨。
6)Q:样本背景信号很强应该怎么处理?
A:可能原因包括:染色后洗涤不充分,可增加洗涤次数;染色过程中干片导致染料粘附严重;多聚甲醛固定时间过长;没有阳性信号而曝光过度导致背景严重等等,同时可以设置对照组(无染料或无Click反应)排除自发荧光干扰。