T4 RNA Ligase 2是一种可以催化双链RNA（dsRNA）、双链DNA(dsDNA)、或RNA/DNA杂合链分子内或分子间的RNA链的5' -P末端与3' -OH末端之间形成磷酸二酯键的酶，其活性依赖ATP的参与。与T4 RNA Ligase 1（货号K3151）不同的是，其对dsRNA中的缺刻（nick）的连接活性要大大高于对ssRNA末端的连接活性。

T4 RNA Ligase 2连接时需要5'磷酸和3'羟基的存在，可以是RNA链或DNA链的5'磷酸基和RNA链的3'羟基之间发生连接反应。主要用于dsRNA进行分子内的环化，缺刻连接（即dsRNA的粘端连接），以及双链核酸结构中RNA 3'羟基与DNA 5'磷酸基的缺刻连接。