T4 RNA Ligase 1是一种可以催化单链RNA（ssRNA）、单链DNA（ssDNA）或单核苷酸分子间或分子内5' -P末端与3' -OH末端之间形成磷酸二酯键的酶，其活性依赖ATP的参与。T4 RNA Ligase 1对于RNA之间的连接效率最高，DNA与RNA之间的连接效率次之，而DNA之间的连接效率最低，也被认为是一种单链RNA连接酶。

T4 RNA Ligase 1用于RNA和RNA之间的连接时需要5'磷酸基团和3'羟基的存在；用于RNA和单核苷酸之间的连接时，单核苷酸必须为5'和3'均磷酸化的形式；对于DNA和RNA之间的连接，DNA提供5'磷酸基团，RNA提供3'羟基连接效率较高，而DNA提供3'羟基，RNA提供5'磷酸基团连接效率很低；当用于DNA和DNA之间的连接时，则效率非常低。T4 RNA Ligase 1常用于RNA环化、RNA的3'末端标记，Oligo RNA及Oligo DNA的合成等。