V5 Epitope Tag Peptide

被识别的V5抗原表位是simian parainfluenza virus type 5（Southernet al., 1991）的RNA聚合酶α亚基中的序列95GKPIPNPLLGLDST108，由于在许多不同物种中都可以产生高亲和性的抗体，因而选择该短肽序列设计标签肽[1]。

含有14个氨基酸的V5表位被插入衣壳蛋白的C端（在ORF2终止密码子之前），从而构建一个重组标记病毒。V5 epitope被展示在衣壳蛋白的表面。在体外和小鼠中，重组标记病毒与亲本病毒具有相似的活动，可以通过聚合酶链反应（PCR）和血清学的方法加以区分[2，3]。

V5/His-epitope tag加入到每个编码序列的氨基末端用以区分质粒编码的蛋白和内源性LRRK2。质粒瞬时转染COS7细胞后，细胞裂解物用V5 epitope tag或LRRK24特异性的抗体通过SDS-PAGE和Western blotting的方法进行分析。

参考文献：
1. Zhou,W.H.,Dong, L.L., Ginsburg,D.,Bouhassira, E.E., Tsai,H.M.,2005. Enzymatically active ADAMTS 13 variants are not inhibited by anti-ADAMTS 13 autoantibodies: a novel therapeutic strategy? J. Biol. Chem. 280, 39934–39941.
2.  Southern,J.A.,Young,D.F.,Heaney, F.,Baumgartner,W.K.,Randall,R.E.,1991.Identi?cation of an epitope on the P and V proteins of simian virus 5 that distinguishes between two isolates with different biological characteristics. J. Gen. Virol. 72,1551–1557
3.  L. Huang, Y. Lu et al. Construction and biological characterisation of recombinant porcine circovirus type 2 expressing the V5 epitope tag. Virus Research. 161 (2011) 115–123
4.  D. MacLeod,J. Dowman, The Familial Parkinsonism Gene LRRK2Regulates Neurite Process Morphology. Neuron 52, 587–593, 2006