定量PCR（qPCR，又称Real-time PCR）是一种非常通用的精确分析基因表达的技术。按方法不同可分为染料法和探针法两类，其中染料法更通用、方便、成本更低。基于染料的qPCR法通过实时监测结合双链DNA的染料发射的荧光，可以在PCR的每个周期间接测量DNA扩增。当在某一个时间点上，检测到的荧光信号显著超过背景，就可以确定Ct值（Cq值）。所获得的Ct值可用于评估目标基因的相对丰度，也可根据适当的标准曲线计算获得绝对数量。

我们的HotStart™ Universal Blue 2X FAST Green qPCR Master Mix (with UDG)在定量目标DNA或cDNA方面具有较短的延伸时间、优越的特异性、强劲的扩增效率、理想的可重复性和稳定性。它是一个2X PreMix，其中的酶为经过突变改造的热启动快速Taq DNA聚合酶，更耐受SYBR Green I的抑制，同时也更加耐受EDTA处理的血液和肝素处理的血液。理想的Taq聚合酶和合适的缓冲液保证了较好的特异性和较高的扩增速度。Mix中的SYBR Green I可嵌入双链DNA的双螺旋小沟区域，当它与每个周期扩增的双链DNA结合时，会发出绿色荧光，通过仪器监测荧光可以实时的间接定量扩增产物。

本产品是为快速实时PCR而设计开发的新型产品，提高了耐用性、特异性和延伸速度，并在信噪比（荧光）、循环域值 (Cq)、线性度和灵敏度方面均有改善。同时，产品中含有特殊的Specific ROX Reference Dye，适用于所有的qPCR仪器，无需在不同的仪器上调整ROX的浓度，只需在配置的反应体系时加入引物和模板既可进行扩增。

本产品含有可视性蓝色染料，可以减少分装差错，该染料对qPCR反应及荧光信号无影响。此外本产品使用了thermolabile UDG+dUTP的防污染体系，从而保证了qPCR扩增结果的准确性，并减少了气溶胶污染导致的假阳性结果。

染料法qPCR有一定的局限性，即SYBR Green I可以插入任何双链DNA，如引物二聚体或其他非特异性的产物，导致非特异性产物发出荧光，因此为了确认产物的特异性，在扩增后，进行熔解曲线分析是必要的。在熔解曲线分析中，在引物退火温度附近出现一个尖峰是较为理想的实验结果。