RIPA Lysis Buffer (Strong)
强 RIPA（RIPA strong）高效组织细胞裂解液，用于总蛋白提取，含常规蛋白酶与磷酸酶抑制剂。
特色产品
- 适用于流式细胞仪和荧光显微镜检测
- 准确区分活细胞/凋亡细胞/坏死细胞
- 用于免疫印迹和质谱分析等后续操作
- 适用于30 KDa-130 KDa大小的蛋白
- 对细胞无毒性
- 步骤更简单，无需有机溶剂
- 可将信号灵敏度提高100倍
- 同时保持稳定的特异性和分辨率
- 提供更高的转录效率并抑制免疫激活
- 使用5-moUTP和Cy5-utp修饰
- 优异的扩增效率、可重复性和稳定性
- 卓越的灵敏度和准确性，操作简单
- 优化的缓冲液和T7 RNA聚合酶混合物
- 20 μL反应体系可获得更高的RNA产量
产品描述
RIPA Lysis Buffer (Strong) 广泛适用于报告基因检测、蛋白激酶实验、免疫测定及蛋白纯化。其核心成分为50 mM Tris (pH 7.4)、150 mM NaCl、1% Triton X-100、1% sodium deoxycholate、0.1% SDS，并含常见蛋白酶和磷酸酶抑制剂（Sodium orthovanadate、Sodium fluoride、EDTA），可有效防止蛋白降解。本裂解液不含全面的蛋白酶及磷酸酶抑制剂，为获得最佳的蛋白保护效果，请额外添加全面的蛋白酶和磷酸酶抑制剂Cocktail。
本产品适用于动物细胞和组织的蛋白提取。所得蛋白样品可用于多种常规免疫学检测，如免疫印迹（WB）、免疫沉淀（IP）及酶联免疫吸附测定（ELISA）等。
以100 mL本品计，6孔板中单个孔需加入150-250 μL裂解液，每瓶可供400-666个孔（样）使用，每20 mg组织需加入150-250 μL裂解液，每瓶可供400-666次使用。具体用量可根据样本密度或裂解效果适当调整。
产品特点
• 适用样本广泛：适用于动物细胞与组织，高效提取胞质、膜及核蛋白。
• 应用兼容性强：兼容 WB、ELISA、IP、BCA 定量、激酶实验、蛋白纯化等多种下游检测。
• 使用便捷：即用型配方，开瓶即用，省去配制时间。
• 选择灵活：提供含抑制剂（K1020）与不含抑制剂（K1120）两款，满足不同实验需求。
产品性质
| 产品有效期 | 12个月 |
| 物理外观 | 液体 |
| 存储条件 | -20°C |
| 运输条件 | 蓝冰 |
| 注意事项 | 本产品仅限于科研使用，不得用于临床诊断或治疗。 |
生物相关数据
质量控制
操作说明
常见问题
主要成分是什么？如何正确保存？
答：主要成分为 50 mMTris（pH 7.4）、150 mM NaCl、1％Triton X-100、1％ sodium deoxycholate、0.1％SDS和一般的蛋白酶和磷酸酶抑制剂（如sodium orthovanadate, sodium fluoride和EDTA）；建议-20℃保存，保质期12个月。若已添加蛋白酶/磷酸酶抑制剂，建议分装保存，避免反复冻融。
该产品是否适合裂解后直接用于质谱MS检测呢？
答：不可以。常规去垢剂（如 SDS、脱氧胆酸钠、Triton X-100、NP-40）会产生强烈的离子抑制效应与背景干扰，严重降低质谱鉴定效率并污染仪器，因此不适用于质谱（MS）分析。质谱检测前需去除去垢剂或者不使用含去垢剂的裂解方法。质谱分析的裂解液建议搭配使用质谱兼容性蛋白酶抑制剂Cocktail（K4001）。
RIPA裂解液能用于免疫共沉淀（Co-IP）吗？
答：需谨慎。RIPA（强）含有离子型去垢剂脱氧胆酸钠，裂解强度高，可能破坏蛋白质-蛋白质相互作用，因此不适合弱相互作用的Co-IP。Co-IP推荐使用更温和的裂解液，如NP-40 (1%)-K1127、Triton X-100 (1%)-K1124、以及用于植物细胞的专用裂解液-K1126。
裂解后的蛋白样品能用常规Bradford法或A280法测浓度吗？
答：不可以。RIPA中含有高浓度去垢剂（SDS、Triton X-100等），会严重干扰Bradford法测定结果，同时RIPA缓冲液组分在280 nm处有强烈吸收，会严重干扰蛋白浓度测定。推荐使用BCA法（推荐普通BCA法-K4101或Micro BCA法-K4102）或去垢剂兼容型Bradford法（K4104）测定蛋白浓度。其中普通BCA法检测浓度范围为50-2000 μg/mL，Micro BCA法检测浓度范围为0.5~20 µg/mL，按需要选择合适的BCA试剂盒。RIPA试剂中含有EDTA，在使用BCA检测时，会有铜离子螯合，建议标准品或对照中使用含相同RIPA裂解液组分进行蛋白定量。
裂解液（瓶内）出现白色沉淀，还能用吗？
答：可以。这通常是SDS在低温下析出所致，将裂解液置于37℃水浴加热溶解，恢复室温后即可正常使用。
裂解产物中出现透明胶状物，正常吗？
答：正常。这是基因组DNA-蛋白复合物。若目标蛋白不与DNA紧密结合，离心取上清即可；若需检测结合紧密的核蛋白，建议超声处理打断DNA后离心取上清。
裂解后样品太粘稠，怎么办？
答：说明基因组DNA释放过多。可用移液器反复吹打约50次，或短暂超声处理以剪切DNA，降低粘度。
若配合使用PMSF，可以提前加入吗？
答：不可以。PMSF在水溶液中半衰期仅约30分钟，必须在使用前现加，每1 mL裂解液加入10 μL（终浓度1 mM）。
裂解后像“浑浊的水”，粘性很小，是什么问题？
答：可能是裂解液用量过多导致的蛋白浓度过低。建议减少裂解液用量，确保覆盖细胞层即可。
细胞裂解不完全怎么办？
答：确保裂解液足量覆盖培养皿表面；冰上孵育时间可延长至15-30分钟，期间剧烈震荡3-4次以促进裂解。
出现蛋白降解，如何解决？
答：蛋白降解通常因未抑制蛋白酶活性。必须在裂解前向裂解液中添加蛋白酶抑制剂混合物，推荐通用型的蛋白酶抑制剂Cocktail（K4002）、磷酸酶抑制剂Coaktail（K1015）和去乙酰化酶抑制剂Cocktail（K1017）。
磷酸化蛋白信号弱或检测不到，怎么办？
答：原因通常是磷酸酶活性导致去磷酸化。必须在裂解前添加磷酸酶抑制剂混合物（如原钒酸钠、氟化钠等），并全程冰上操作。
RIPA（强）、RIPA（中）和RIPA（弱）如何选择？
答：做pull-down或免疫共沉淀首选弱RIPA（保护互作），仅做Western Blot检测总蛋白首选强RIPA（提取最彻底，含SDS和脱氧胆酸钠），RIPA （中）是两者间的折中选项，适用于对互作要求不高或提取效率介于两者之间的场景。
APExBIO的几款裂解液以及蛋白提取试剂盒如何选购？
| 货号 | 产品名称 | 有效裂解成分 | 裂解强度 | 适用范围 | 主要用途 |
| K1020 | RIPA Lysis Buffer (Strong) | Triton X-100 (1%), sodium deoxycholate (1%), SDS (0.1%), inhibitors | 强 | 裂解细胞（器）膜和细胞核膜；提取总蛋白，包括胞质蛋白、核蛋白、膜蛋白和细胞器（膜）蛋白 | WB, IP |
| K1120 | RIPA Lysis Buffer (Strong, without inhibitors) | Triton X-100 (1%), sodium deoxycholate (1%), SDS (0.1%) | 强 | 裂解细胞（器）膜和细胞核膜；提取总蛋白，包括胞质蛋白、核蛋白、膜蛋白和细胞器（膜）蛋白 | WB, IP |
| K1121 | RIPA Lysis Buffer (Medium) | NP-40 (1%), sodium deoxycholate (0.5%), SDS (0.1%), inhibitors | 中 | 裂解细胞膜、细胞器膜（中）和细胞核膜（中）；包括胞质蛋白、核蛋白、膜蛋白和细胞器（膜）蛋白 | WB, IP |
| K1122 | RIPA Lysis Buffer (Weak) | NP-40 (1%), sodium deoxycholate (0.25%), SDS (0.1%), inhibitors | 温和 | 裂解细胞膜、细胞器膜（一般）和细胞核膜（一般）；提取胞质蛋白 | WB, IP |
| K1123 | Cell lysis buffer for WB and IP | Triton X-100 (1%), inhibitors | 温和 | 裂解细胞膜，保留蛋白-蛋白相互作用 | WB, IP, Co-IP |
| K1124 | Cell lysis buffer for WB and IP without inhibitors | Triton X-100 (1%) | 温和 | 裂解细胞膜，保留蛋白-蛋白相互作用 | WB, IP, Co-IP, |
| K1127 | NP-40 Lysis Buffer | NP-40 (1%), inhibitors | 温和 | 主要裂解质膜，保留细胞核，较Triton X-100温和 | WB, IP, Co-IP |
| K1125 | Plant RIPA Lysis Buffer(Strong) | Triton X-100 (1%), sodium deoxycholate (1%), SDS (0.1%), inhibitors | 强 | 专用于植物细胞、原生质体和植物组织 | WB, IP |
| K1126 | Plant Cell lysis buffer for WB and IP | Triton X-100 (1%), inhibitors | 温和 | 专用于植物细胞、原生质体和植物组织 | WB, IP, Co-IP |
| K1128 | SDS Lysis Buffer | SDS (1%), inhibitors | 强 | 裂解细胞（器）膜和细胞核膜；提取总蛋白，包括胞质蛋白、核蛋白、膜蛋白和细胞器（膜）蛋白 | WB, IP, Co-IP |
| K1137 | Nucleic fluid extraction isolation kit | 专用提取试剂 | 温和 | 专用于哺乳动物细胞及原代细胞 | WB, IP, Co-IP |
| K1138 | Mitochondria Isolation Kit (Cultured Cells) | 专用提取试剂 | 温和 | 专用于哺乳动物细胞及原代细胞 | WB, IP, Co-IP |
| K4061 | Active Protein Extraction Reagent (Mammal) | 专用提取试剂 | 温和 | 专用于哺乳动物活性蛋白抽提 | WB, IP, Co-IP, 蛋白活性实验 |
| K4062 | Active Protein Extraction Reagent (Insect) | 专用提取试剂 | 温和 | 专用于昆虫细胞活性蛋白抽提 | WB, IP, Co-IP, 蛋白活性实验 |
| K4063 | Active Protein Extraction Reagent (Bacteria) | 专用提取试剂 | 温和 | 专用于细菌细胞活性蛋白抽提 | WB, IP, Co-IP, 蛋白活性实验 |
针对IP实验：
·对于普通的IP或co-IP，我们首先推荐使用Western及IP细胞裂解液(K1123和K1124，其中K1124不含抑制剂)，主要成分是1% Triton X-100且含有部分蛋白酶和磷酸酶抑制剂成分（K1123），满足一般实验需求。
·对于某些特殊蛋白的IP，如果发现K1123和K1124效果不是非常理想，可以尝试用强点的RIPA裂解液(强、中或弱)或更弱点的NP-40裂解液。选择1-若IP背景很高，即非特异的蛋白也被IP下来，则选用裂解强度较高的RIPA裂解液(强或中)，其中K1020（含抑制剂）和K1120（不含抑制剂）为强RIPA裂解液、K1121（含抑制剂）为中RIPA裂解液。选择2-若目的蛋白无法被IP下来，即裂解液的强度过强，则选用较为温和（比Triton X-100强）的RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液（比Triton X-100若），其中K1122（含抑制剂）为弱RIPA裂解液、K1127为NP-40裂解液。
对于Western blot实验：
.普通的Western blot实验，我们首先推荐使用Western及IP细胞裂解液(K1123和K1124，其中K1124不含抑制剂)，主要成分是1% Triton X-100且含有部分蛋白酶和磷酸酶抑制剂成分（K1123），满足一般实验需求。
·对于某些难溶解蛋白的Western blot实验，如果发现K1123和K1124效果不是非常理想，可以尝试使用裂解强度更高的裂解液例如RIPA裂解液(强或中)或SDS裂解液（超强），其中其中K1020（含抑制剂）和K1120（不含抑制剂）为强RIPA裂解液、K1121（含抑制剂）为中RIPA裂解液、K1128（含抑制剂）为SDS裂解液。
对于特殊样本与需求类型：
·对于植物样品，若实验为WB和IP/co-IP可选择K1126，其主要成分为1% Triton X-100和部分蛋白酶和磷酸酶抑制剂成分，若实验为WB和IP/IP，可选择K1125，其主要成分类似强RIPA裂解液，裂解能力较K1125更强，但对于co-IP的兼容性不是很好。
·对于细胞质蛋白和细胞核蛋白抽提（核质抽提），可选择专用试剂盒K1137。
·对于线粒体和线粒体蛋白抽提，可选择专用试剂盒K1138
·对于活性蛋白抽提及后续活性蛋白纯化与功能研究，哺乳动物细胞活性蛋白抽提选择专用试剂盒K4061、昆虫细胞活性蛋白抽提选择专用试剂盒K4062、细菌细胞活性蛋白抽提选择专用试剂盒K4063。
沪公网安备 31011002003500