Safe DNA Gel Stain

1. Q：染料如何操作？可否在制胶时直接加入？

A：本品为溶解于DMSO的10000 X浓缩液。在制备琼脂糖凝胶时，您可以以1:10000的比例稀释进琼脂糖凝胶缓冲液（1X TBE或1X TAE），加入琼脂糖粉末后加热溶解。或者在溶解后尚未凝固的琼脂糖凝胶中按1:10000比例稀释。您也可以选择电泳结束后将凝胶置于含SYBR Safe染色溶液（使用1X TBE或 1X TAE以1:3300的比例稀释）中进行孵育。

2. Q：用Safe DNA凝胶染料进行染色，可使用哪些激发波长进行观察？如何选择？

A：Safe DNA凝胶染料有两个主要的激发峰：紫外区280 nm和可见光区502 nm。因此254 nm或300 nm紫外激发光以及488 nm激光、470 nm LED和广泛的蓝色光源都能够有效激发。推荐使用蓝光而不是紫外激发Safe DNA凝胶染料，因为蓝光可将DNA损害降至最低，提高克隆效率，能降低非特异性背景荧光，并减少暴露风险。

3. Q：使用EB滤光片及其相机设置能否看到Safe DNA凝胶染料？

A：Safe DNA凝胶染料的最大发射波长为530 nm。使用可透过500 nm以上的EB滤光片及其相关相机设置可适用于Safe DNA凝胶染料，通常只需对曝光或补光稍作调整。若EB滤光片只能透过600 nm或以上的光，则不适用于Safe DNA凝胶染料。

4. Q：Safe DNA凝胶染料的实验兼容性和溴化乙锭(EB)相同吗？

A：Safe DNA凝胶染料与目前EB所有下游应用兼容，包括从凝胶上切割PCR产物、凝胶纯化、克隆等实验，以及RNA染色。Safe DNA凝胶染料无致突变性、无毒性，是危险性更低的EB替代品。

5. 使用Safe DNA凝胶染料的注意事项？

A：Safe DNA凝胶染料仅在很窄的pH范围内有效，约为pH 7-8，超出此范围荧光信号将迅速消失。另外在染色较低分子量（100-200 bp）核酸时效能较低，不推荐使用。避免将使用过的Safe DNA凝胶染料重复用于第二块凝胶，因为这会大大降低其灵敏度。