XRN-1是一种高效的核糖核酸外切酶，其作用依赖于底物的5'-单磷酸（5'-p）修饰。在Mg²⁺的催化作用下，该酶可沿5'→3'方向特异性消化5'端带有单磷酸修饰的单链RNA。此外，XRN-1也可作用于5'端为单磷酸结构的单链 DNA（ssDNA），但催化效率显著较低。XRN-1具有严格的底物特异性，无法消化以下类型的底物：5'端带有三磷酸（5'-ppp）、二磷酸（5'-pp）、帽子结构（5'-cap）及羟基（5'-OH）修饰的RNA，双链DNA（dsDNA）以及5'端为羟基、三磷酸或二磷酸修饰的单链DNA。同时，该酶也不能消化5'磷酸末端凹陷的双链RNA、DNA与RNA杂合链，以及处于二级结构中的5'磷酸化RNA。该酶常用于测序文库构建中从总RNA分离富集mRNA、体外转录产物中去除模板DNA及副产物以及RNA的5’末端分析研究等。