定量PCR（qPCR，又称Real-time PCR）是一种非常通用的精确分析基因表达的技术。按原理不同可分为染料法和探针法两类。常用的探针包括Taqman探针、分子信标、双杂交探针、MGB探针等。其中以TaqMan探针最为经典，使用最为广泛。Taqman探针能与目标序列特异性杂交，其5’端标记荧光基团，3’端标记淬灭基团。当探针完整时，由于荧光共振能量转移(FRET)，探针上的荧光基团被淬灭基团淬灭。当引物介导的延伸反应到达探针位置时，Taq酶的5' → 3'外切酶活性会导致结合在目标序列上的探针逐渐被水解，5’端的荧光基团和3’端的淬灭基团分离，使它们的间距超过10 nm，超出荧光共振能量转移的范围，荧光基团此时在合适激发光的作用下，发出荧光。每经过一个PCR循环，就会有更多的荧光基团被释放，荧光强度与新合成的目标片段数量成正比，从而实现检测。探针5'端常用的荧光标记有FAM、HEX、TET、JOE、NED、Cy3、TAMRA,、Cy5、Cal Fluor Gold540、Cal Fluor Orange560等等，3'端标记常用BHQ1、BHQ2、BHQ3、TAMRA、Dabcyl、NFQ-MGB等淬灭基团，实际设计探针时，请根据qPCR仪的型号，需要检测的目的基因的不同，实验类型的不同来进行设计。 One-step Universal Probe RT-qPCR 4×Mix 是一种基于探针法的一步法实时荧光定量PCR预混液，用于检测目标RNA。其工作原理是：首先，逆转录酶将RNA逆转录为cDNA；随后，DNA聚合酶对cDNA 进行扩增，整个过程在单管内一次性完成。此外本产品使用了Thermolabile UDG+dUTP的防污染体系，从而保证了qPCR扩增结果的准确性，并减少了气溶胶污染导致的假阳性结果。本产品含有特殊配方的ROX参比染料，适用于所有qPCR仪器平台，无需在不同仪器上调整ROX浓度，确保实验结果的一致性和可靠性。本品使用了非荧光可见示踪染料，便于观察反应体系的建立，该染料不会干扰实时检测。 One-step Universal Probe RT-qPCR 4×Mix是一款便捷的4×预混液，仅需额外加入引物、探针和模板即可使用，操作简便且兼容快速程序，能够显著缩短检测时间。它可在广泛的动态范围内实现高准确度和高重复性的目标基因定量。本产品适用于各种病原体检测，RNA病毒检测，基因表达分析等多种应用场景。