Phos binding reagent (Phosbind) Biotin
等同于Phos-tag Biotin BTL-104，包含ZnCl2，用于检测纯化的磷酸化蛋白
| 规格 | 价格 | 货期 | 数量 |
|---|---|---|---|
| 5mg | ￥3181.00 | 现货 | |
| 10mg | ￥4545.00 | 现货 |
特色产品
- 适用于流式细胞仪和荧光显微镜检测
- 准确区分活细胞/凋亡细胞/坏死细胞
- 用于免疫印迹和质谱分析等后续操作
- 适用于30 KDa-130 KDa大小的蛋白
- 对细胞无毒性
- 步骤更简单，无需有机溶剂
- 可将信号灵敏度提高100倍
- 同时保持稳定的特异性和分辨率
- 提供更高的转录效率并抑制免疫激活
- 使用5-moUTP和Cy5-utp修饰
- 优异的扩增效率、可重复性和稳定性
- 卓越的灵敏度和准确性，操作简单
- 优化的缓冲液和T7 RNA聚合酶混合物
- 20 μL反应体系可获得更高的RNA产量
产品描述
Phosbind是一种新型的磷酸盐结合标签和功能分子，在中性pH（生理pH）条件下可以特异性结合磷酸离子。Phosbind是一种双环金属络合物（1,3-bis[bis(pyridin-2-ylmethyl) amino]propan-2-olato dizinc(II) complex），是一种选择性的磷酸结合标签，在中性pH的水溶液中，其对苯基磷酸酯二价阴离子（PH-OPO32-）的Kd值为25 nM* (*：在Zn2+的情况下)。因此，用Phosbind衍生物进行磷酸化蛋白质组研究的各种方法被开发出来。这里，我们引入了Phosbind的一种新应用，即用生物素化Phosbind锌(II) 复合物对电印迹PVDF膜上的全部磷酸化蛋白进行化学发光检测。
Phosbind Biotin提供了一种检测PVDF膜上磷酸化蛋白的敏感方法，该方法需要链霉素偶联辣根过氧化物酶（HRP）和化学发光检测试剂。
产品特点
1. 高敏感性检测磷酸化蛋白磷酸化蛋白的高灵敏度检测。
2. Phosbind Biotin的特异性结合与氨基酸种类、序列无关。
3. 可适用于抗体再杂交和质谱分析等后续工作。
4. 实验流程与使用HRP标记抗体相类似。
产品性质
| 产品有效期 | 12个月 |
| 物理外观 | 固体 |
| CAS号 | 753451-66-0 |
| 分子式 | C40H50N10O4S |
| 分子量 | 766.95 |
| 化学名称 | 6-(((3-(bis(pyridin-2-ylmethyl)amino)-2-hydroxypropyl)(pyridin-2-ylmethyl)amino)methyl)-N-(2-(5-((3aS,4S,6aR)-2-oxohexahydro-1H-thieno[3,4-d]imidazol-4-yl)pentanamido)ethyl)nicotinamide |
| 溶解度 | insoluble in H2O; insoluble in EtOH; ≥32.3 mg/mL in DMSO |
| SMILES | O=C(C1=CN=C(C=C1)CN(CC(CN(CC2=CC=CC=N2)CC3=CC=CC=N3)O)CC4=CC=CC=N4)NCCNC(CCCC[C@H]5[C@]6([H])[C@](NC(N6)=O)([H])CS5)=O |
| 存储条件 | 4°C |
| 运输条件 | 蓝冰 |
| 注意事项 | 本产品仅限于科研使用，不得用于临床诊断或治疗。 |
生物相关数据
常见问题
Q1： Phosbind Biotin的核心优势是什么？
主要优势包括：①无辐射；②无需对PVDF膜进行封闭处理；③Phosbind的特异性结合与氨基酸种类、序列无关；④可适用于免疫印迹和质谱分析等后续工作；⑤实验流程与使用HRP标记抗体相类似。
Q2： 灵敏度如何？
可达到ng级别，可检测到低于1 ng的磷酸化蛋白。建议使用高发光度的化学发光试剂。
Q3： 兼容性如何？
兼容PVDF膜、常规Western Blot成像系统、TBS-T缓冲体系。可适用于细胞裂解液、组织提取物等样本类型，也可用于抗体微阵列。
Q4： Phosbind Biotin与磷酸化抗体相比有什么优势？
主要优势包括：①特异性不依赖氨基酸序列；②一个试剂检测所有磷酸化蛋白；③PVDF膜无需封闭；④可进行下游分析。
Q5： 产品如何保存？
固体粉末在2-8°C避光保存，有效期12个月。溶解后的母液需在4°C避光保存，可稳定保存至少6个月。
Q6： 除了本产品，还需要准备哪些试剂？
需要准备：①链霉亲和素偶联的HRP溶液；②化学发光检测试剂；③离心过滤装置（NMWL = 30,000超滤管）；④基础试剂-甲醇和TBST；⑤Stripping Buffer（可选）。
Q7： 产品可以使用多少次？
Phosbind Biotin（10 mg）约可使用130~1300次，单次成本较低。相比使用多种磷酸化抗体，成本优势明显。
Q8： 批次稳定性如何？与酶抑制剂兼容吗？
产品经过严格QC，批间差异小。母液室温稳定至少6个月，固体粉末4°C稳定12个月。兼容常规蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，但应避免使用含磷酸盐的缓冲液。
Q9： 识别特异性如何？
Phosbind特异性结合磷酸单酯二价阴离子，与氨基酸种类和序列无关。不与去磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白结合。
Q10： 温度/pH/化学试剂有何要求？
在中性生理环境下生成稳定复合物。应避免使用含磷酸盐的缓冲液（如β-甘油磷酸、焦磷酸），因为磷酸根会竞争性结合Phosbind。避免使用螯合剂（如EDTA），因为会螯合锌离子。
Q11： 时间周期多长？
PVDF膜孵育步骤中，PVDF膜经TBST浸泡至少1小时，随后与Sol. PB-SH（Phosbind Biotin Streptavidin-HRP混合工作液）孵育30分钟，最后洗涤两次各5分钟，整体流程约2小时。
Q12： 使用Phosbind Biotin需要封闭吗？
不需要。封闭会导致灵敏度下降，这是Phosbind Biotin方法区别于传统Western Blot的重要特点。
Q13： 与纯化/检测体系兼容吗？
兼容后续的抗体再杂交和质谱分析。可使用含有合适的Stripping buffer（如中性洗脱液K4412，主成分DTT、SDS和Tris缓冲液）进行剥脱。
Q14： 可以使用硝酸纤维素膜吗？
建议使用PVDF膜。Phosbind Biotin方法推荐使用PVDF膜以获得最佳检测效果。
Q15： 实验没有信号或信号很弱，可能的原因？
可能原因包括：①试剂未完全溶解；②工作液存放过久；③PVDF膜转移效率低；④链霉亲和素-HRP或化学发光试剂添加顺序错误；⑤样品处理过程中发生去磷酸化。
Q16： 背景信号高，如何解决？
高背景通常与以下因素有关：①膜未充分浸润（这是最常见原因，会导致背景高且呈斑点状，甚至观察不到蛋白信号）；②使用了含磷酸盐的缓冲液；③链霉亲和素-HRP浓度过高；④洗涤不充分。解决方案包括：确保膜完全浸润、避免使用磷酸盐缓冲液、滴定检测试剂浓度、增加洗涤次数和时间。
Q17： 在具体产品选择上，Phosbind Acrylamide（F4002）、BTL-104系列（F4001）与BTL-105（F4004）区别是什么？
这三个产品虽然同属Phosbind系列，但用途定位不同：BTL-104系列（F4001）与BTL-105（F4004）均可用于PVDF膜上磷酸化蛋白的检测，两者区别仅在于生物素连接臂长度不同，使用效果无明显差异，推荐选择溶解性更高的BTL-104系列（F4001）；而Phosbind Acrylamide（F4002）则用于SDS-PAGE凝胶中磷酸化蛋白的分离，可基于磷酸化程度不同将磷酸化蛋白与非磷酸化蛋白、不同磷酸化形式的蛋白在电泳过程中分开。若需同时实现分离与检测，建议先用Phosbind Acrylamide进行SDS-PAGE分离，再转膜后用Phosbind Biotin（BTL-104或BTL-105）进行PVDF膜孵育检测，两者配合使用可获得更完整的磷酸化蛋白信息。
沪公网安备 31011002003500