响应原理：未被酶切时探针的荧光和光声信号都处于淬灭状态；FAPα特异性水解Cs-FAP后可以释放出荧光母核Cs，同时开启近红外荧光（765 nm）与光声（725 nm）双重信号输出。

体外实验：Cs‑FAP对FAPα灵敏度高，荧光检测限为0.667 ng/mL，光声检测限为 0.19 μg/mL；同时对其他蛋白酶、活性小分子几乎无应答，特异性很高。

光谱、HPLC、TDDFT计算和分子对接共同验证了酶切激活机制，确认探针可以进入FAPα催化口袋，由Ser624等关键残基介导水解反应。

毒性：CCK‑8实验显示Cs-FAP在0‑50 μM范围内对多种细胞毒性极低。

功能验证：TGF‑β浓度升高，Cs‑FAP荧光信号剂量依赖性上升；siRNA敲低FAPα之后探针信号显著下降，证明细胞内信号完全依赖FAPα表达。

安全性：静脉注射Cs‑FAP后肝肾功能和主要脏器均无明显异常，探针注射后主要富集于肝脏，30 min信号达到顶峰。

成像能力验证：随纤维化病程加重，肝脏的荧光、光声信号同步升高；探针信号与羟脯氨酸、Masson、天狼星红染色、α‑SMA免疫荧光的纤维化指标高度相关。

初筛：首先通过体外酶活实验从95种药用植物提取物筛选得到16个阳性提取物；

复筛：利用高内涵成像在TGF‑β激活的LX‑2细胞中进一步评估；随后在3D肝微组织（HepaRG + LX‑2 + HUVEC共培养球状体）这一更贴近生理环境的模型中进行验证；最终锁定苏木提取物活性最强。

通过制备型HPLC分离苏木组分，经过多轮活性追踪并结合HPLC‑QTOF‑MS/MS鉴定；购买商品化单体进行复筛，最终锁定低毒性苏木查尔酮（Sappanchalcone, Sap）为目标化合物。

表面等离子体共振SPR测得Sap与FAPα结合KD≈3.88 μM；CETSA实验证明Sap在活细胞内结合并稳定FAPα蛋白；分子对接和分子动力学模拟揭示了Sap 结合FAPα底物口袋，竞争性抑制酶活。

细胞水平：Sap可以下调FAPα活性与蛋白表达，抑制LX‑2增殖、迁移、侵袭；同时下调纤维化标志基因ACTA2、COL1A1、COL3A1；效果优于阳性对照秋水仙碱。

血清肝功能ALT/AST以及肝组织羟脯氨酸结果提示：Sap剂量依赖性改善肝损伤、减少胶原沉积。

组织病理H&E、Masson、天狼星红染色显示：Sap能够减轻肝脏结构的破坏，抑制I、III型胶原堆积。

对比阳性药物秋水仙碱、FAPα抑制剂UAMC1110：Sap在多个模型中表现更优；值得注意的是，UAMC1110在BDL模型中改善效果十分有限，而Sap仍展现显著抗纤维化药效。

药代动力学：腹腔给药Sap吸收快速，肝脏优先富集，肝脏内滞留时间较长，适合肝脏疾病干预；血浆蛋白结合率中等。急性、长期毒性实验提示Sap安全性良好。

转录组分析：对CCl₄模型小鼠肝脏进行转录组测序，模型组中大量ECM重构和炎症相关基因上调；Sap处理后能够逆转大部分纤维化相关基因的表达。KEGG富集分析提示PI3K‑AKT通路被显著抑制。

WB证实：Sap处理后，肝脏组织中PI3K、AKT磷酸化水平明显下降。