氧化应激（Oxidative Stress）是机体活性氧（ROS）与抗氧化系统动态失衡导致的病理生理状态，与衰老、神经退行性疾病、心血管疾病及肿瘤等多种疾病的发生发展密切相关。在之前的活性氧（ROS）检测知多少中我们介绍了ROS常见的检测方法。
今天，我们就来介绍一下氧化应激中另一个重要指标---谷胱甘肽（Glutathione, GSH）。在抗氧化防御体系中，谷胱甘肽不仅是直接清除自由基的关键分子，更是调控氧化还原信号通路的枢纽，在维持细胞稳态中发挥不可替代的作用。
谷胱甘肽是由谷氨酸（Glu）、半胱氨酸（Cys）和甘氨酸（Gly）通过γ-谷氨酰键和肽键连接形成的三肽（γ-Glu-Cys-Gly），分子式为C10H17N3O5S。其独特的γ-谷氨酰键（而非常见的α-肽键）使其不易被普通肽酶降解，从而在胞内稳定存在。
根据氧化还原状态，谷胱甘肽主要以两种形式存在：
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还原型谷胱甘肽（Reduced Glutathione, GSH）：含游离巯基（-SH），具有强还原性，是细胞内主要的活性形式（占比>90%），直接参与自由基清除；
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氧化型谷胱甘肽（Oxidized Glutathione, GSSG）：由两个GSH分子通过二硫键（-S-S-）偶联形成，为氧化产物，其比例升高是氧化应激的重要标志。
图1：谷胱甘肽代谢通路
关键指标
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GSH/GSSG比例：这个比值是评估细胞氧化还原平衡的重要参数。正常情况下，细胞内GSH/GSSG比值较高，这表明细胞内处于良好的抗氧化还原状态。当氧化应激发生时，GSH被大量消耗转化为GSSG，导致GSH/GSSG比值显著降低。
其他可检测指标
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总谷胱甘肽含量：指细胞或组织中还原型谷胱甘肽（GSH）和氧化型谷胱甘肽（GSSG）的总和。检测这个含量可以综合反映细胞内谷胱甘肽的整体水平。
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谷胱甘肽-S-转移酶（GST）酶活：氧化应激状态下，细胞内会产生大量的活性氧（ROS）和过氧化物，GST可以通过催化GSH与这些有害物质反应，减少它们对细胞的损伤。
高同型半胱氨酸血症 (HHcy)会引起多种神经系统疾病，研究显示铁死亡在HHcy中扮演重要角色。研究人员从植物中提取得到了一种天然类黄酮糖酮(Tectorigenin)，为了验证 Tectorigenin是否能通过抑制铁死亡从而减轻高同型半胱氨酸 (Hcy)引起的细胞毒性，作者进行了一系列实验。因为GSH/GSSH比值是衡量铁死亡的重要指标之一，作者对不同处理后的BV-2细胞进行检测，结果发现Hcy造模组的GSH/GSSH会明显降低，而使用Tec处理后会明显回升。
图2：不同处理后检测BV-2细胞中的GSH/GSSH比例
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GSH and GSSG Assay Kit (K4630)
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Total Glutathione Detection Kit (DTNB Colorimetric Method) (K4629)
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BODIPY 581/591 C1 (C8003)
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Lipid Hydroperoxide (LPO) Assay Kit with 96-well plate (K2266)
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Dihydroethidium (DHE) (C3807)
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MitoSOX Red (B8808)
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