描述

链霉亲和素（Streptavidin）是一种来源于阿维丁链霉菌（Streptomyces avidini）分子量约为66 kDa的四聚体蛋白。主要特点是每个亚基均可结合一个生物素分子，且该结合是高特异性以及超强非共价相互作用（Kd≈10⁻¹⁵ M）。

应用

1. 蛋白质和核酸的检测与纯化（如亲和层析、Pull-down）

2. 免疫分析（如ELISA、Western blot）

3. 细胞和组织标记（原位杂交）

4. 药物靶向递送

5. 生物传感器开发

案例

案例一：链霉亲和素-生物素系统在ELISA检测中的应用

操作步骤：

1. 包被抗体：将捕获抗体稀释后包被于ELISA板，4℃过夜。
2. 封闭：用含BSA的封闭液封闭非特异性结合位点，室温1小时。
3. 加入待测样品：孵育1-2小时，洗涤去除未结合物质。
4. 加入生物素标记的检测抗体：孵育1小时，洗涤。
5. 加入链霉亲和素-HRP（辣根过氧化物酶）：孵育30分钟，洗涤。
6. 显色反应：加入TMB底物，显色后加入终止液，测定OD值。

结果展示：

案例二：链霉亲和素磁珠在蛋白质纯化中的应用

操作步骤：

1. 生物素标记抗体制备：将特异性抗体用生物素标记试剂标记。
2. 磁珠预处理：链霉亲和素磁珠用PBS洗涤，去除保存液。
3. 抗体与磁珠结合：将生物素标记抗体与磁珠孵育30分钟，形成磁珠-抗体复合物。
4. 样品孵育：加入待纯化蛋白样品，孵育1小时。
5. 磁性分离：磁力架吸附磁珠，去除未结合蛋白。
6. 洗涤与洗脱：用洗涤液洗涤磁珠，最后用洗脱液洗脱目标蛋白。
7. 检测：如SDS-PAGE等。

结果展示：

案例三：链霉亲和素-生物素系统在细胞荧光标记中的应用

操作步骤：

1. 细胞固定与通透化：用4%多聚甲醛固定细胞，0.1% Triton X-100通透化。
2. 生物素标记抗体孵育：加入生物素标记的一抗，室温孵育1小时。
3. 链霉亲和素荧光探针孵育：加入链霉亲和素-FITC或链霉亲和素-Cy3，室温孵育30分钟。
4. 洗涤与封片：PBS洗涤后，加入抗荧光淬灭剂封片。
5. 荧光显微镜观察：荧光显微镜下观察并拍照记录。

结果展示：

案例四：链霉亲和素-生物素系统的定向偶联桥接作用

操作步骤（文献案例）：

1. 链霉亲和素修饰磁性纳米颗粒（SA-MNPs）的制备：Fe3O4-COOH磁性纳米颗粒羧基活化后与链霉亲和素混合孵育实现SA偶联，获得链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒（SA-MNPs）。
2. Biotin与细胞膜结合

a. 细胞膜生物素化：取人肺腺癌上皮细胞（A549细胞），使用膜不可透过的生物素化试剂（Sulfo-NHS-Biotin），4°C孵育30分钟。

b. 细胞膜提取： 超声破碎并离心收集细胞膜沉淀，获得生物素化的细胞膜悬液。

3. 细胞膜与SA-MNPs结合：将10 mg SA-MNPs与生物素化细胞膜悬液在4°C条件下缓慢混合孵育60分钟，洗涤后最终获得细胞膜内外翻转包覆的磁性纳米颗粒（IOCMMNPs）。

结果展示：

产品

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参考文献

J Immunother Cancer. 2022 May;10(5):e004113.

Anal Chem. 2021 Jun 8;93(22):7898-7907