接受来自 E1 复合物的泛素，并催化其与其他蛋白质的共价连接。体外催化“Lys-11”-以及“Lys-48”-连接的多泛素化。与 E2 CDC34 和 SCF（FBXW11） E3 连接酶复合物合作，用于 NFKBIA 的多泛素化，导致其随后的蛋白酶体降解。作为引发剂 E2，用单泛素在“Lys-21”和/或“Lys-22”位点引发磷酸化的 NFKBIA 靶标。然后通过 CDC34 进行泛素链延伸，从 UBE2D3 引发的 NFKBIA 连接的泛素构建泛素链。还作为引发剂 E2 与 RNF8 一起用于 PCNA 的引发。PCNA的单泛素化及其随后的多泛素化是DNA损伤耐受性（DDT）通路操作中的重要事件，该通路在S期由紫外线或化学试剂引起的DNA损伤后被激活。与 BRCA1/BARD1 E3 连接酶复合物结合，在电离辐射后的 DNA 损伤位点进行泛素化，导致 DNA 修复。靶向 DAPK3 进行泛素化，从而影响细胞核中早幼粒细胞白血病蛋白核体 （PML-NB） 的形成。与 MDM2 和 TOPORS E3 连接酶结合使用，可使 p53/TP53 泛素化。支持 NRDP1 介导的 ERBB3 和 BRUCE 泛素化和降解，从而触发细胞凋亡。与 CBL E3 连接酶结合使用，靶向 EGFR 在质膜上进行多泛素化，以及在其内化和在内体上转运的过程中。结合 STUB1 E3 质控 E3 连接酶，泛素化未折叠的蛋白质以催化其立即破坏。