定义

Flag标签是由8个特定氨基酸残基（DYKDDDDK）构成的多肽，一般以Flag或3X Flag形式呈现。它能够借助基因重组技术，精准地连接到目的基因的5'端或3'端，进而生成带有Flag标签的目的蛋白。

Flag标签具备诸多优势，使其在蛋白研究领域得到广泛应用。它不会与目的蛋白发生相互作用，也不会干扰目的蛋白的正常功能，这确保了研究过程中目的蛋白的天然特性得以保留。此外，N端的Flag标签能够被诸如肠激酶之类的工具酶切除，从而获得无标签的目的蛋白，这为后续研究提供了极大便利。

在检测和纯化方面，Flag标签可通过Flag抗体、Anti - Flag磁珠或Anti - Flag亲和凝胶进行高效检测和纯化。其纯化分离原理基于抗体-抗原之间高度特异性的结合，这种特异性结合能够精准地识别并捕获带有Flag标签的目的蛋白，从而实现目标蛋白的有效分离和纯化，在蛋白表达、纯化、鉴定、相互作用以及功能研究等多方面发挥着不可或缺的重要作用。

Figure 1 Immuno-Enrichment of FLAG-Tagged Protein Complexes

产品

试剂盒组成

以K4705 Human IL-7 ELISA Kit为例

产品优势

样本适用性广：适用于血清、血浆、细胞、组织裂解液、细胞培养上清液等

产品选择性广：高结合量琼脂糖Beads和Kit，以及快速便捷筛选的磁珠Beads和Kit

规格多样性：特别是Anti-Flag琼脂糖填料有丰富的规格选择，如5/10/25/50/100 mL

特异性强：高特异性Flag单克隆抗体标记Beads

操作方便：免疫沉淀试剂盒为一整套即用型IP沉淀产品

重复性好：Anti-Flag琼脂糖填料可环保再生并重复使用，一般可重复使用3-10次

操作流程

01 试剂准备：

 以K4705 Human IL-7 ELISA Kit为例，每个样品使用100/ 500 μL裂解比例准备

02 样本准备：

细胞裂解裂解后离心，获取上清蛋白，如500 μL

03 磁珠预处理：

准备20 μL磁珠，1X TBS清洗3次

04 样本孵育：

加入500 μL后，翻转混合仪上孵育-常温1 h，4℃ 4-6 h或过夜

05 洗涤：

加入500 μL裂解液后移液器轻轻吹打重悬，去上清，至上清液OD280小于0.05为止

06 洗脱：

• 3X Flag竞争洗脱法：加入100 μL 3X Flag标签肽洗脱液（1X），室温摇晃孵育30-60 min，或4℃孵育1-2 h，磁力架分离1 min取上清，即为Flag标签蛋白
• 酸性洗脱法：加入50-100 μL酸性洗脱液，室温孵育5-10 min，但不要超过15 min，后磁力架分离1 min取上清，即为Flag标签蛋白
• SDS-PAGE上样缓冲液洗脱法：加入100 μL蛋白Loading Buffer (1X)，100℃加热10 min，后磁力架分离1 min取上清，即为Flag标签蛋白和Flag抗体的轻链与重链

07 检测与保存：

SDS-PAGE、功能实验等检测，或-20~-70℃保存待用

验证数据

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参考：

[1] Valdez-Sinon AN, Gokhale A, Faundez V, Bassell GJ. Protocol for Immuno-Enrichment of FLAG-Tagged Protein Complexes. STAR Protoc. 2020 Aug 11;1(2):100083. doi: 10.1016/j.xpro.2020.100083. PMID: 33111116; PMCID: PMC7580096.