定义

His标签是由4至10个组氨酸残基组成的短肽序列，常用的是6个组氨酸的六聚组氨酸标签。其纯化主要基于固定化金属离子亲和层析（IMAC）技术，即利用蛋白质表面的某些氨基酸（如组氨酸）能与金属离子发生相互作用的原理来分离蛋白质。具体而言，组氨酸残基中的咪唑基可与过渡金属离子（如Ni²⁺、Co²⁺等）形成配位键 ，在合适的缓冲液条件下（一般pH7-8），将带有His标签的蛋白样品通过固定有金属离子的亲和层析材料时，His标签蛋白会与固定化金属离子特异性结合，而其他无His标签的蛋白因缺乏这种结合位点，会直接流过层析柱被除去。洗脱时，可通过提高缓冲液中咪唑的浓度，使咪唑与His标签竞争结合金属离子，从而将His标签蛋白从层析柱上洗脱下来；或者降低缓冲液的pH值，使金属离子质子化，进而破坏His标签与金属离子的配位键，实现蛋白的洗脱。

His标签蛋白因His标签分子量小（约0.84kD）对蛋白影响小、兼容性强、纯化效率高和检测方便等特点，广泛用于蛋白表达与纯化、蛋白质结构与功能研究、蛋白定位与检测以及构建双亲和标签应用于多种表达系统等用途。

产品

试剂盒组成

以K4206 His-tag Protein Purification Kit (Reductant and Chelator Resistant)为例

产品优势

质量可靠：经过了严格的质量检测和验证，具有良好的性能和稳定性，能够保证实验结果的准确性和可重复性；

样本适用性广：适用于大肠杆菌、哺乳动物细胞、昆虫细胞及杆状病毒等其他表达系统中表达的GST标签重组蛋白；

操作简便快捷：试剂盒提供了His标签蛋白纯化所需的相关试剂，一站式满足纯化所需；

用途广泛：可用于变性，非变性以及各种耐受条件下的His标签蛋白纯化；

镍柱性能优异：具有亲和力高、结合容量多、非特异性结合低、稳定性好等特点。

操作流程

以K4206 His-tag Protein Purification Kit (Reductant and Chelator Resistant)为例

1  样本准备：准备适量大肠杆菌种诱导表达His标签重组蛋白的菌液沉淀

2  裂解：Lysis Buffer裂解（可配合超声），冰上孵育后离心取上清

3  样本孵育结合：添加His-tag Purification Resin后4℃冰上摇床孵育后离心

4  清洗：Wash Buffer清洗凝胶2次

5  洗脱：加入Elution Buffer洗脱，离心取上清，即为His标签的目的蛋白

6  后续处理：蛋白定量、SDS-PAGE等检测，也可-20~-70℃保存。

验证数据

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Reference

Spriestersbach A, Kubicek J, Schäfer F, Block H, Maertens B. Purification of His-Tagged Proteins. Methods Enzymol. 2015; 559:1-15. doi: 10.1016/bs.mie.2014.11.003. Epub 2015 May 4. PMID: 26096499.