在之前的巨噬细胞清除方法大盘点中，我们给大家介绍了常见的巨噬细胞清除方法。其中氯膦酸盐脂质体是目前应用最多的方法。这种方法已经应用于多种物种的巨噬细胞清除，如小鼠、大鼠、斑马鱼、兔等等。借助于不同的注射方法（如静脉注射、腹腔注射、皮下注射、鼻内给药等），可以实现不同器官中的巨噬细胞清除。

肝脏是人体中巨噬细胞最多的器官，占总巨噬细胞的80-90%左右。研究显示肝脏巨噬细胞在维持肝脏稳态和调节代谢等方面发挥重要作用。除了肝脏以外，脾脏是另一个巨噬细胞非常丰富的器官，脾脏巨噬细胞在免疫监视、病原体清除和免疫调节中起着重要作用。

本期我们就给大家分享一下使用氯膦酸盐脂质体清除小鼠肝脏或脾脏中巨噬细胞的方案。

一般性清除方案-肝脏/脾脏

根据之前的文献报道，静脉注射氯膦酸盐脂质体可以清除肝脏、脾脏、骨髓和血液中的巨噬细胞。此外，腹腔注射也可以达到清除肝脏或脾脏巨噬细胞的目的。在此，我们总结了目前常见的肝脏或脾脏清除的一般性方案。但是因为大家实验使用的小鼠品系，年龄和模型各不相同，建议大家结合文献进行给药方案的优化。

文献解读：

除了以上的一般性总结方案，我们也收集了几篇关于肝脏或脾脏巨噬细胞清除的文献供大家参考。

文献一：肝脏清除

• 小鼠：C57BL/6J
• 注射方式：静脉注射
• 注射方案：实验组小鼠静脉注射200 μL的Clodronate liposomes。
• 清除效果检测：注射2天后取小鼠肝脏并分离得到肝非实质细胞，通过流式分析巨噬细胞清除效率，结果显示Clodronate liposomes可以显著清除Kupffer细胞。

图1：通过氯膦酸盐脂质体清除小鼠Kupffer细胞

(引用文献：Nat Commun 15, 6136 (2024).)

文献二：肝脏清除

• 小鼠：C57BL/6
• 注射方式：腹腔注射
• 注射方案：实验组小鼠腹腔注射Clodronate liposomes，注射剂量为200 μL/20 g小鼠。
• 清除效果检测：注射48 h后取小鼠肝脏并分离得到非实质细胞，通过流式分析巨噬细胞清除效率，结果显示Clodronate liposomes有很好的清除效果。

图2：通过氯膦酸盐脂质体清除小鼠肝脏巨噬细胞

(引用文献：Front Immunol. 2022 Jan 12;12:811164.)

文献三：脾脏清除

• 小鼠：C57BL/6J
• 注射方式：眼眶后静脉注射
• 注射方案：实验组每只小鼠眼眶后静脉注射200 μL Clodronate liposomes，对照组注射同等剂量 PBS liposomes。
• 清除效果检测：注射48 h后取小鼠脾脏并制备单细胞悬液，对单细胞悬液进行MHCII和F4/80抗体染色，通过流式分析清除效果。结果表明脂质体可以显著清除脾脏中的巨噬细胞。且作者发现注射一次就已经有很好的清除效果，没有必要注射2次。

图3：通过氯膦酸盐脂质体清除小鼠脾脏巨噬细胞

(引用文献：STAR Protoc. 2021 Dec 8;2(4):101004.)

文献四：脾脏清除

• 小鼠：C57BL/6
• 注射方式：腹腔注射
• 注射方案：造模前一天和造模当天实验组小鼠腹腔注射200 μL Clodronate liposomes，对照组注射等量PBS liposomes，造模后每隔三天补打200 μL/小鼠直到实验结束。
• 清除效果检测：实验结束后取脾脏分离得到单细胞悬液，对单细胞悬液进行CD45、CD11b和F4/80抗体染色，通过流式分析巨噬细胞清除效率。

图4：通过氯膦酸盐脂质体清除小鼠脾脏巨噬细胞

(引用文献：Cancers (Basel). 2022 Mar 14;14(6):1474.)

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