抗体描述

抗体（Antibody）是一类由B淋巴细胞产生的球蛋白，它们具有独特的能力，能够识别并结合特定的蛋白质或其他生物分子，这一特性使得抗体成为纯化、检测和定量靶分子的重要工具。通过免疫小鼠、大鼠、兔子、山羊等动物，可以产生多克隆或单克隆抗体。在科研领域，常用的抗体还包括那些与荧光染料或生物素等标记物结合的形式，以便于在实验中进行可视化和信号放大。这些抗体产品在研究中扮演着关键角色，它们的多样性和特异性使其成为生物医学研究中不可或缺的内容。

抗体结构、片段和组成

抗体分类

在哺乳动物中，抗体根据其包含的重链被划分为五个主要同种型或类别，这些类别分别是IgG、IgA、IgD、IgE和IgM，它们对应的重链分别是γ、α、δ、ε和μ。每种重链在恒定域的数目和序列、铰链区结构上存在差异，这些差异允许将每个抗体同种型进一步划分为亚型。例如，在人类中，IgG同种型可以进一步分为四个亚型或亚类，即IgG1至IgG4。这些亚型在功能、亲和力以及与其他免疫分子的相互作用上可能有所不同，从而在免疫应答中扮演着不同的角色。IgG铰链区易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解产生不同片段，如Fab、F(ab')2、Fab'等。

常见抗体生产技术

传统免疫动物法

通过将免疫原注射至动物（如大鼠、小鼠和兔等）体内，刺激动物体内B细胞分化成熟，产生、分泌抗体，然后通过收集动物血清，分离纯化而获得成品抗体，此抗体主要是多克隆抗体。

噬菌体展示技术

噬菌体展示技术生产抗体的原理是将编码抗体片段的基因与噬菌体表面蛋白的基因融合，使得这些抗体片段能够展示在噬菌体表面，通过与目标抗原的特异性结合来筛选出具有所需亲和力和特异性的抗体，实现从大规模噬菌体抗体库中快速识别和富集特定抗体的目的。

杂交瘤技术

这是制备单克隆抗体的经典方法，由Köhler和Milstein在1975年发明。通过将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤。这些杂交瘤细胞能够产生针对一种抗原表位的特异性抗体，即单克隆抗体。

重组抗体技术

通过基因工程技术，可以将编码抗体的基因在体外进行操作，如人源化改造，然后在合适的表达系统中（如哺乳动物细胞、酵母或细菌）生产重组抗体。

重组抗体技术示例

抗体应用

APExBIO的抗体支持多个应用领域，包括Western blot、ELISA、流式细胞分析Fc、免疫组化IHC、免疫细胞化学ICC、染色质免疫共沉淀Ch-IP、免疫（共）沉淀IP/Co-IP等。

产品及特点

特点：

1 数量丰富：超5200多种经严格验证的高品质一抗；
2 反应种属多样：多达30余种反应样本物种来源；
3 经典宿主：宿主主要为Mouse和Rabbit；
4 高特异性和高亲和力：为实验的准确性和可靠性提供了坚实保障；

5 靶点丰富：覆盖蛋白研究的热门领域的绝大部分靶点蛋白，如癌症、干细胞、神经生物学、免疫学、表观遗传学等。

抗体选择

1 一抗选择

以MA4453 Anti-Phospho-MCM2 (Ser40) Rabbit Monoclonal Antibody为例。
反应种属和目的蛋白一致性（样本种属）：

1 先依据所检测样本的种属，如Human、Mouse、Rabbit等，选择反应种属包含有样本种属的抗体，如Human样本，靶标种属为Human和Mouse，满足（如下图）。目的蛋白ID为P49736。

2 若不存在对应样本的物种，如大鼠Rat，此时样本的种属虽未列入抗体说明书上的反应种属中，但并不意味着该抗体不适用于检测该物种的蛋白，而只是表示该物种尚未用此抗体验证过。考虑到当氨基酸序列同源性较高，抗体可能与不同物种的同种靶蛋白有交叉反应的现象，可以依次对抗体适用性做一些判断，如通过序列比对的方法来预测交叉反应，具体为通过Expasy和NCBI 中BLAST来进行不同物种蛋白同源性比对。如果比对结果证明同源性较高（例如90%以上），可以考虑该物种的可能适用性。

2 宿主/Host选择

尽可能选择与样本不同种属的一抗，以避免样本里面的内源性免疫球蛋白发生反应，造成高背景。例如，如果要检测的是小鼠样本，那么一抗尽量不要选小鼠或者大鼠来源的，也就是宿主/Host不要是鼠的，可以选择兔源Rabbit等一抗。

3 实验方法的选择

首先确认抗体说明书上的应用/application种包含待做的实验类型，如WB实验。如下图所示，该抗体可用于WB、石蜡切片和IP实验。

4 二抗选择

一抗宿主/Host和亚型

首先保证二抗的反应种属与一抗的来源宿主相对应，如MA4453 Anti-Phospho-MCM2 (Ser40) Rabbit Monoclonal Antibody一抗的宿主/Host为Rabbit，从产品参数可产品名字均可获得，那么二抗就需要选择anti-一抗宿主/Host的二抗，且抗体亚型也需要跟一抗保持一致（如鼠IgG1/2a/2b/3）。

（https://www.apexbio.cn/product/search?keyword=anti-Rabbit&page=1&cid=132）

二抗偶联物

二抗的偶联物通常包含酶（AP/HRP）、荧光基团（FITC/Cy3/Cy5/405/488/555/594）、生物素等，按照实验设计选择对应二抗。如做WB实验，可选择HRP标记二抗产品。

二抗的形式Isotype

选择规则如下：

1 若无特殊要求都可选择完整的全片段形式（二抗名称含H+L）的双价抗体；

2 若做间标流式或用IHC/ICC/IF检测Fc受体表达丰富的样本（例如淋巴结、脾脏、外周血等），建议选择F(ab')2 片段形式（双价），因为这类二抗分子量较小，比较容易穿透组织，而且能避免与活细胞上的Fc受体结合，产生非特异性背景；

3 若用两只来源相同的一抗做IF双染实验，或者一抗与所研究组织种属来源相同时，则需要选择Fab 片段形式的二抗（单价）来封闭内源性的免疫球蛋白。

预吸附二抗

预吸附（又称交叉吸附）是为了提高抗体的特异性额外增加的纯化步骤。具体方法是，利用固定化具有潜在交叉反应性的种属血清蛋白（一抗），让含二抗的溶液通过含有这种固定血清蛋白的基质柱。非特异性二抗会留在柱中，而通过基质柱的高特异性二抗会被收集下来。也就是说，经过交叉吸附（预吸附）处理的二抗，抗体特异性更高，非特异性结合更少。

高特异性时需要考虑使用预吸附二抗，如样本含有内源性免疫球蛋白时可减少二抗和内源性免疫球蛋白结合的可能，或多色实验（多色免疫组化、荧光多标或多色流式实验）需要考虑。

例如多色实验中，样本为带有内源性免疫球蛋白的人源组织，做免疫荧光双染，一抗分别为anti-X Mouse和anti-Y Rabbit，那么二抗则需要选择Anti-Mouse (H+L) 交叉吸附Human、Rabbit，以及Anti-Rabbit (H+L) 交叉吸附 Human、Mouse的产品。

可提供验证图类型（部分）

产品

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一抗链接：

https://www.apexbio.cn/antibody/primary-antibody.html

二抗链接：

https://www.apexbio.cn/antibody/secondary-antibody.html

一抗/二抗稀释液：

https://www.apexbio.cn/protein-biology/antibody-dilution.html

参考

[1]Christer Wingren, Ulf Alkner, Ulla-Britt Hansson. Antibody Classes. 2005 Sep 23, https://doi.org/10.1038/npg.els.0003985.

[2]Valldorf B, Hinz SC, Russo G, Pekar L, Mohr L, Klemm J, Doerner A, Krah S, Hust M, Zielonka S. Antibody display technologies: selecting the cream of the crop. Biol Chem. 2021 Mar 23;403(5-6):455-477. doi: 10.1515/hsz-2020-0377. PMID: 33759431.

[3]Zhang Y. Evolution of phage display libraries for therapeutic antibody discovery. MAbs. 2023 Jan-Dec;15(1):2213793. doi: 10.1080/19420862.2023.2213793. PMID: 37222232; PMCID: PMC10210849.

[4]Strazza V, Rossi M, Avati A, Tiseo G, Falcone M, Cusi MG, Menichetti F, Ricciardi-Castagnoli P, Tinti C, Pileri P. Rapid generation of human recombinant monoclonal antibodies from antibody-secreting cells using ferrofluid-based technology. Front Immunol. 2024 Apr 18;15:1341389. doi: 10.3389/fimmu.2024.1341389. PMID: 38698845; PMCID: PMC11064063.

[5]DeLuca KF, Mick JE, DeLuca JG. Production and purification of recombinant monoclonal antibodies from human cells based on a primary sequence. STAR Protoc. 2022 Dec 16;3(4):101915. doi: 10.1016/j.xpro.2022.101915. Epub 2022 Dec 9. PMID: 36595892; PMCID: PMC9763751.