2×Taq PCR Master Mix(with dye)
mRNA synthesis
In vitro transcription of capped mRNA with modified nucleotides and Poly(A) tail
Tyramide Signal Amplification (TSA)
TSA (Tyramide Signal Amplification), used for signal amplification of ISH, IHC and IC etc.
Phos Binding Reagent Acrylamide
Separation of phosphorylated and non-phosphorylated proteins without phospho-specific antibody
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)
A convenient and sensitive way for cell proliferation assay and cytotoxicity assay
SYBR Safe DNA Gel Stain
Safe and sensitive stain for visualization of DNA or RNA in agarose or acrylamide gels.
Inhibitor Cocktails
Protect the integrity of proteins from multiple proteases and phosphatases for different applications.
Taq DNA聚合酶具有5'→3'DNA聚合酶和微弱的5'→3'核酸外切酶的能力,但没有3'→5'外切酶的能力,这意味着在3'末端会出现一个dA突出。使用该特性,它可被用于TA克隆。在PCR反应中,Taq DNA聚合酶的延伸率约为1-2kb / min,这取决于基因的复杂性。对于大多数模板,使用1kb / min。
反应体系只需要添加引物,模板和ddH2O,大幅度简化了实验步骤,减少了个人错误并提高了结果的可重复性。
该Master Mix含有染料,这意味着它可以在扩增后直接进行电泳,无需添加上样缓冲液。如果需要对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳,可以使用我们的产品SYBR Safe DNA Gel Stain(目录号:A8743)加入胶中。
用于一般PCR或其他实验的理想产品
快速简单的即用型PCR预混物
每个反应成本更低
已含染料
Component | Size |
2X Taq PCR Master Mix(with dye) | |
1 mL | |
1 mL x 5 | |
1 mL x 20 | |
1 mL x 50 | |
1 mL x 100 | |
将2X Master Mix储存在-20°C。 |
常见问题 | 可能原因 | 解决方案 |
PCR产物没有或非常少 | ||
引物设计不佳 | 选择适当的引物设计软件进行引物设计 | |
待扩增片段GC含量偏高或片段长 | 推荐使用其它更适合的DNA聚合酶 | |
退火温度不佳;延伸时间太短;循环数太少 | 优化PCR实验条件 | |
模板浓度过低;实验样品 DNA损伤或降解 | 适当加大模板量;重新制备模板 | |
模板质量太差 | 用适当的DNA纯化方法例如柱纯化等纯化模板DNA | |
引物浓度过低;Mg2+ 浓度未优化 | 适当调整引物浓度及Mg2+浓度 | |
扩增特异性差,非特异性扩增 | ||
引物设计不完善 | 引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体,可降低引物浓度,必要时重新设计引物 | |
模板质量太差 | 模板不纯,被污染,需重新制备模板; 模板降解或过量,通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新纯化模板 |
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PCR 循环条件未优化 | 如果出现比目的条带小的杂带,可通过提高退火温度,降低循环数调整;如果出现比目的条带大的杂带,可缩短延伸时间、降低循环数 | |
空白对照出现扩增产物 | ||
引物设计不合理 | 扩增序列与非目的扩增序列有同源性,PCR也可以扩增出非靶序列的序列,重新设计引物 | |
携带污染 | 若扩增产物条带大小与目的条带一致,说明有污染;更换新的Mix、水或引物重复实验;反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染 | |
扩增的条带亮度不够 | ||
引物降解 | 检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解,必要可更换引物 | |
模板质量 | 首先确认模板的质量,长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;如果模板没有了,可用首次扩增产物按倍比稀释后作为模板进行二次扩增 | |
酶浓度 | 可适当提高酶的使用量 | |
PCR 循环条件未优化 | 可尝试使用Touch Down程序;延长延伸时间,提高循环数 |