Phosbind Biotin BTL-105

Phosbind是一种新型的磷酸盐结合标签和功能分子，在中性pH（生理pH）条件下可以特异性结合磷酸离子。Phosbind是一种双环金属络合物（1,3-bis[bis(pyridin-2-ylmethyl) amino]propan-2-olato dizinc(II) complex），是一种选择性的磷酸结合标签，在中性pH的水溶液中，其对苯基磷酸酯二价阴离子（PH-OPO32-）的Kd值为25 nM* (*：在Zn2+的情况下)。因此，用Phosbind衍生物进行磷酸化蛋白质组研究的各种方法被开发出来。这里，我们引入了Phosbind的一种新应用，即用生物素化Phosbind锌(II) 复合物对电印迹PVDF膜上的全部磷酸化蛋白进行化学发光检测。

Phosbind Biotin BTL-105提供了一种检测PVDF膜上磷酸化蛋白的敏感方法，该方法需要链霉素偶联辣根过氧化物酶（HRP）和化学发光检测试剂。而且，Phosbind Biotin BTL-105是附着有Phosbind分子的生物素衍生物，使其可以用链霉素结合的琼脂糖快速有效地纯化磷酸根阴离子（如磷酸化多肽、磷酸化蛋白和磷酸化脂等）。

1. 高敏感性检测磷酸化蛋白磷酸化蛋白的高灵敏度检测。

2. Phosbind Biotin的特异性结合与氨基酸种类、序列无关。

3. 可适用于抗体再杂交和质谱分析等后续工作。

4. 实验流程与使用HRP标记抗体相类似。

1. M. Ihara, N. Yamasaki, A. Hagiwara, A. Tanigaki, A. Kitano, R. Hikawa, H. Tomimoto, M. Noda, M. Takanashi, H. Mori, N. Hattori, T. Miyakawa, and M. Kinoshita. Sept. 4, a Component of Presynaptic Scaffol and Lewy Bodies, Is Required for the Suppression of α-Synuclein Neurotoxicity, Neuron, 53, 519-533 (2007).

2. M. Kubo-Murai, K. Hazeki, N. Sukenobu, K. Yoshikawa, K. Nigorikawa, K. Inoue, T. Yamamoto, M. Matsumoto, T. Seya, N. Inoue, O. Hazeki. Protein kinase Cδ binds TIRAP/Mal to participate in TLR signaling, Mol. Immunol., 44, 2257-2264 (2007).

3. S. Shigaki, T. Yamaji, X. Han, G. Yamanouchi, T. Sonoda, O. Okitsu, T. Mori, T. Niidome, and Y. Katayama. A Peptide Microarray for the Detection of Protein Kinase Activity in Cell Lysate, Anal. Sci ., 23, 271-275 (2007).

4. T. Mori, K. Inamori, Y. Inoue, X. Han, G. Yamanouchi, T. Niidome, Y. Katayama. Evaluation of protein kinase activities of cell lysates using peptide microarrays based on surface plasmon resonance imaging, Anal. Biochem, 375, 223-231 (2008).

5. X. Zhu, J. Dai, X. Tan, Y. Zhao, and W. Yang. Activation of an AMP-activated protein kinase is involved in post-diapause development of Artemia franciscana encysted embryos, BMC Develop. Biol., 9, 21 (2009).