Phosbind Acrylamide

Phosbind是一种新型的磷酸盐结合标签和功能分子，在中性pH（生理pH）条件下可以特异性结合磷酸离子。Phosbind是一种双环金属络合物（1,3-bis[bis(pyridin-2-ylmethyl) amino]propan-2-olato dizinc(II) complex），是一种选择性的磷酸结合标签，在中性pH的水溶液中，其对苯基磷酸酯二价阴离子（PH-OPO32-）的Kd值为25 nM* (*：在Zn²⁺的情况下)。

Phosbind Acrylamide提供了一种特异性的电泳过程（锰 (II)- Phosbind SDS-PAGE），可同时对磷酸化蛋白及其对应的非磷酸化形式进行分析。

此产品最适合做的蛋白大小在30 KDa-130 KDa之间

1. 可识别Ser / Thr / Tyr 的所有磷酸化形式。

2. 可适用于免疫印迹和质谱分析等后续操作。

3. 可用总抗体而非抗磷酸化蛋白的抗体即可同时检测磷酸化和非磷酸化的蛋白。

4. 在制备SDS-PAGE凝胶时只需在丙烯酰胺溶液中简单加入Phosbind Acrylamide和MnCl₂溶液*即可。

（*：由于1个Phosbind可结合2个锰离子（Mn²⁺），在凝胶中加入5.0 mM Phosbind Acrylamide水溶液和10 mM MnCl₂溶液。）

(1) 染色

• 适于激酶实验。

• 与常规SDS-PAGE几乎相同的机制。

(2) Western Blotting

• 不需要准备针对磷酸化蛋白的抗体。

• 可用于内源性蛋白的磷酸化分析。

• 不需要放射性同位素标记。

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2. S. Yamada, H. Nakamura, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and Y. Shiro. Separation of a phosphorylated histidine protein using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis, Analytical Biochemistry, 360, 160-162 (2007).

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