Tn5 DNA Library Prep Kit for Illumina (for 5 ng DNA)
mRNA synthesis
In vitro transcription of capped mRNA with modified nucleotides and Poly(A) tail
Tyramide Signal Amplification (TSA)
TSA (Tyramide Signal Amplification), used for signal amplification of ISH, IHC and IC etc.
Phos Binding Reagent Acrylamide
Separation of phosphorylated and non-phosphorylated proteins without phospho-specific antibody
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)
A convenient and sensitive way for cell proliferation assay and cytotoxicity assay
SYBR Safe DNA Gel Stain
Safe and sensitive stain for visualization of DNA or RNA in agarose or acrylamide gels.
Inhibitor Cocktails
Protect the integrity of proteins from multiple proteases and phosphatases for different applications.
Tn5 DNA Library Prep Kit for Illumina (for 5 ng DNA) 是专用于Illumina高通量测序平台的、经过优化的、适用于5 ng 起始模板DNA量的基因组文库构建试剂盒。传统文库构建一般包括DNA片段化、末端修复和接头连接等多步操作,而我们的试剂盒采用的是Tn5转座酶法,可将上述步骤在一步反应内完成;操作简便且极大缩短文库构建时间,微量DNA模板即可进行文库构建。
Tn5 DNA Library Prep Kit for Illumina (for 5 ng DNA) 提供的酶预混液及缓冲液等均经过了严格的质量控制和功能验证,保真度高、稳定性强、重复性好。
该试剂盒适用于包括人、动物、植物、微生物基因组及PCR产物等各种纯化的DNA样品。若样品为PCR产物,则长度应大于500 bp。因为转座酶无法作用于DNA末端,为避免PCR文库末端覆盖度降低,建议将PCR产物末端延长50-100 bp。
Overview of the Workflow
1.一管式酶促反应,DNA片段化和接头连接等同时进行,操作简便
2.单个样品建库流程仅需90分钟
3.样本起始DNA量可低至5 ng,高文库转化效率
4.酶预混液及缓冲液等均经过了严格的质量控制和功能验证,保真度高、稳定性强、重复性好
Components | 24 rxns | 96 rxns |
Transposase Mix | 120 μL | 480 μL |
2X Tagmetation Buffer | 240 μL | 960 μL |
5X Stop Solution | 120 μL | 480 μL |
Amplify Enzyme | 24 μL | 96 μL |
5X Amplify Buffer | 240 μL | 960 μL |
dNTP Mixture | 96 μL | 384 μL |
Control DNA | 10 μL | 10 μL |
建议将5X Stop Solution室温保存,Transposase Mix 4°C保存,其他组分-20°C保存。 |
1)Q:该类高通量文库构建试剂盒适用于什么样品?
A:该类试剂盒(货号K1801-K1803)适用于包括人、动物、植物、微生物基因组等各种纯化的DNA样品。试剂盒也可以用于打断PCR产物、质粒、cDNA等双链DNA样品。样品为PCR产物,应保证其长度>300 bp。因转座酶无法作用于DNA末端,因此PCR产物最末端50 bp测序覆盖度可能会有所降低。推荐在制备PCR产物时将待测区域两末端各延长50 -100 bp,以避免出现末端测序覆盖度降低的情况。
2)Q:起始模板DNA量(如1 ng)是否一定要使用对应的试剂盒(如Tn5 DNA Library Prep Kit for Illumina (for 1 ng DNA))的试剂盒?
A:是的,不同的试剂盒中酶的浓度不同。采用不恰当的试剂盒则易导致模板DNA片段化不完全或者片段偏大,导致最终的文库与预期相差较远。
3)Q:该类试剂盒是利用Tn5转座酶打断DNA,是否会存在偏好性?
A:转座酶打断时会存在一定的偏好性,但并不影响测序结果及数据分析。
4)Q:该类试剂盒是否包含打断步骤?
A:包含。试剂盒采用新型的转座酶法进行DNA片段化,将繁琐的DNA片段化 、末端修复和接头连接反应等步骤变为一步简单的酶促反应,显著缩短了实验耗时。
5)Q:为什么打断的片段偏大?
A:文库打断的片段偏大的可能原因包括:1) input DNA量过多(转座酶对input DNA样品的量十分敏感);2) input DNA中可能存在抑制剂等;建议用荧光法准确测定浓度,按照试剂盒推荐量加入,减少input DNA的量会减少大片段的产生;或者增加一定的打断时间;采用可靠的DNA纯化方法,去除可能干扰转座酶工作的化学物质。
6)Q:为什么打断的片段偏小?
A:文库打断的片段偏小的可能原因有:1) input DNA量过少;2) DNA样品降解。建议增加Input DNA 的量,使用高质量的DNA样品,或者减少DNA片段化时间。