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THZ531

 
Catalog No.
A8736
CDK12 和CDK13共价抑制剂
组合的产品项目
规格价格库存 数量
5mg
¥ 1,090.00
现货
25mg
¥ 4,090.00
现货

电话: 021-55669583

邮箱: sales@apexbio.cn

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A

背景

THZ531是首个CDK12和CDK13的共价抑制剂,IC50值分别为158 nM和69 nM[1]。

包含CDK12和CDK13的复合物调节转录延伸和加工,包括mRNA剪切和3’-端RNA加工。CDK12和CDK13的缺失,或者他们的辅因子细胞周期蛋白K的缺失可阻碍Pol II持续合成和RNA加工[1]。

 THZ531是一种不可逆的CDK12和CDK13共价抑制剂。THZ531有效抑制CDK12和CDK13的IC50值分别为158 nM和69 nM,而抑制CDK7和CDK9的效力要弱50倍以上,IC50值分别为8.5 μM和10.5 μM。在Jurkat细胞中,THZ531可逆地减少细胞增值,IC50值为50 nM。THZ531以剂量和时间依赖的方式诱导细胞凋亡。THZ531也减少Pol II C端结构域(Pol II)的Ser2磷酸化,其是活性转录延伸的标志,从而导致关键超增强子相关的转录因子基因和DNA损伤响应(DDR)基因表达的失活[1]。

 

Reference:

1.Zhang T, Kwiatkowski N, Olson CM, et al. Covalent targeting of remote cysteine residues to develop CDK12 and CDK13 inhibitors. Nat Chem Biol. 2016 Oct;12(10):876-84.

文献引用

化学属性

Physical AppearanceA solid
StorageStore at -20°C
M.Wt558.07
Cas No.1702809-17-3
FormulaC30H32ClN7O2
Solubility≥55.8 mg/mL in DMSO; insoluble in H2O; ≥4.9 mg/mL in EtOH
Chemical Name(R,E)-N-(4-(3-((5-chloro-4-(1H-indol-3-yl)pyrimidin-2-yl)amino)piperidine-1-carbonyl)phenyl)-4-(dimethylamino)but-2-enamide
SDFDownload SDF
Canonical SMILESClC1=CN=C(N[C@H]2CN(C(C3=CC=C(NC(/C=C/CN(C)C)=O)C=C3)=O)CCC2)N=C1C4=CNC5=C4C=CC=C5
运输条件 蓝冰运输或根据您的需求运输。
一般建议不同厂家不同批次产品溶解度各有差异,仅做参考。若实验所需浓度过大至产品溶解极限,请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。溶液形式一般不宜长期储存,请尽快用完。

试验操作

激酶实验 [1]:

激酶实验

使用0.2 μM CDK–cyclin复合物进行放射性激酶活性测定。通常,在含有0.2 μM活性激酶的35 μl反应体积在激酶缓冲液中平衡,激酶缓冲液包含40 mM Hepes(pH 7.6)、34 mM NaCl、34 mM KCl、10 mM MgCl2、5%甘油和1×PhosSTOP。加入预冷的ATP至终浓度为200 μM和3μCi[γ-32P] ATP和50 μM含有5个磷酸化位点的底物肽,并将反应混合物在30℃、350 rpm的恒温混合器中温育30分钟。通过加入终浓度为50 mM的EDTA来终止反应。使用Optitran BA-S85增强膜将各15 μl的样点等分到纸方块上。用0.75%(v/v)磷酸将纸方块洗涤3次,持续5分钟,每个纸方块至少使用5 ml洗涤溶液。在Beckman扫描计数器(Beckman Coulter)中计数放射性1分钟。将化合物THZ531以不同浓度加入到0.2 μM CDK–cyclin复合物中,并在30℃和350 rpm下孵育1至540分钟,然后将ATP和底物加入到反应混合物中。

细胞实验[1]:

细胞系

Jurkat细胞

溶解方法

该化合物可溶于DMSO。若获取更高浓度的溶液,可在37℃下孵育10分钟,随后在超声波浴中摇匀。-20℃以下可储存数月。

反应条件

50-1200 nM,6 h

应用

THZ531导致Jurkat细胞增殖的显著和不可逆的降低,IC50为50 nM。THZ531以剂量依赖性和时间依赖性方式增加亚G1期细胞含量。高剂量的THZ531造成明显的膜联蛋白V信号,72小时引发30-40%的膜联蛋白V染色细胞。THZ531选择性降低Ser2磷酸化水平,而对CTD pSer5或pSer7水平无明显影响。50 nM THZ531引起一小部分基因的表达丧失。

注意事项

由于实验环境的不同,实际溶解度可能与理论值略有不同,请测试室内所有化合物的溶解度。

References:

[1]. Zhang T, Kwiatkowski N, Olson C M, et al. Covalent targeting of remote cysteine residues to develop CDK12 and CDK13 inhibitors[J]. Nature chemical biology, 2016.

质量控制