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Phosbind Acrylamide
等同于Phos-tag Acrylamide,包含MnCl2,用于磷酸化和非磷酸化蛋白的分离

Phosbind Acrylamide

产品编号:F4002
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规格 单价 库存 订购数量
5mg ¥3,500.00 现货
10mg ¥5,000.00 现货
50mg ¥12,500.00 现货

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Sample solution is provided at 25 µL, 10mM.

引用文献

1. Yu J, Deng T, et al. "Structural basis for protein phosphatase 1 recruitment by glycogen-targeting subunits." FEBS J. 2018 Dec;285(24):4646-4659. PMID:30422398
2. Yin Y, Wu S, et al. "The MAPK kinase BcMkk1 suppresses oxalic acid biosynthesis via impeding phosphorylation of BcRim15 by BcSch9 in Botrytis cinerea." PLoS Pathog. 2018 Sep 13;14(9):e1007285. PMID:30212570
3. Sauvé V, Sung G, et al. "Mechanism of parkin activation by phosphorylation." Nat Struct Mol Biol. 2018 Jul;25(7):623-630. PMID:29967542

产品描述

Phosbind是一种新型的磷酸盐结合标签和功能分子,在中性pH(生理pH)条件下可以特异性结合磷酸离子。Phosbind是一种双环金属络合物(1,3-bis[bis(pyridin-2-ylmethyl) amino]propan-2-olato dizinc(II) complex),是一种选择性的磷酸结合标签,在中性pH的水溶液中,其对苯基磷酸酯二价阴离子(PH-OPO32-)的Kd值为25 nM* (*:在Zn2+的情况下)。

Phosbind Acrylamide提供了一种特异性的电泳过程(锰 (II)- Phosbind SDS-PAGE),可同时对磷酸化蛋白及其对应的非磷酸化形式进行分析。

质量控制

质量控制和MSDS

批次:

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化学性质

CAS号 SDF
分子式 C33H38N8O3 分子量 594.71
溶解度 >29.7mg/mL in DMSO 储存条件 2-10℃
运输条件 试用装:蓝冰运输。
其他可选规格:常温运输或根据您的要求用蓝冰运输。
一般建议 为了使其更好的溶解,请用37℃加热试管并在超声波水浴中震动片刻。不同厂家不同批次产品溶解度各有差异,仅做参考。若实验所需浓度过大至产品溶解极限,请添加助溶剂助溶或自行调整浓度。

产品特点

1. 可识别Ser / Thr / Tyr 的所有磷酸化形式。

2. 可适用于免疫印迹和质谱分析等后续操作。

3. 可用总抗体而非抗磷酸化蛋白的抗体即可同时检测磷酸化和非磷酸化的蛋白。

4. 在制备SDS-PAGE凝胶时只需在丙烯酰胺溶液中简单加入Phosbind Acrylamide和MnCl2溶液*即可。

(*:由于1个Phosbind可结合2个锰离子(Mn2+),在凝胶中加入5.0 mM Phosbind Acrylamide水溶液和10 mM MnCl2溶液。)

(1) 染色

• 适于激酶实验。

• 与常规SDS-PAGE几乎相同的机制。

(2) Western Blotting

• 不需要准备针对磷酸化蛋白的抗体。

• 可用于内源性蛋白的磷酸化分析。

• 不需要放射性同位素标记。

作用原理

产品应用

1. 酪氨酸激酶Abl磷酸化的时间进程

磷酸化的酪氨酸经GST结合蛋白酪氨酸激酶Abl 及其底物肽(Abltide)制备,并分别用常规SDS-PAGE和Phosbind. SDS-PAGE进行分离。

磷酸化蛋白和非磷酸化蛋白用常规SDS-PAGE是无法分开的(上图:缺乏Phosbind)。

而Phosbind SDS-PAGE (下图:100 μM Phosbind Acrylamide)可以确定在聚丙烯酰胺凝胶中磷酸化蛋白及其非磷酸化蛋白的时程比率。

参考文献

1. E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, K. Takiyama, and T. Koike. Phosphate-binding tag: A new tool to visualize phosphorylated proteins, Molecular & Cellular Proteomics, 5, 749-757 (2006).

2. S. Yamada, H. Nakamura, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike, and Y. Shiro. Separation of a phosphorylated histidine protein using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis, Analytical Biochemistry, 360, 160-162 (2007).

3. E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike. A mobility shift detection method for DNA methylation analysis using phosphate affinity polyacrylamide gel electrophoresis, Analytical Biochemistry, 378, 102-104 (2008).

4. E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, H. Ujihara, and T. Koike. Mobility shift detection of phosphorylation on large proteins using a Phos-tag SDS-PAGE gel strengthened with agarose, Proteomics, 9, 4098- 4101 (2009).

5. E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike. Separation and detection of large phosphoproteins using Phos-tag SDS-PAGE, Nature Protocols, 4, 1513-1521 (2009).

实验操作

成分和储存条件

组分 规格
Phosbind Acrylamide 5mg/10mg/50mg
MnCl2 100mg